收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

南方鲇雄激素受体(AR)全长cDNA的克隆及分析

黄宝锋  
【摘要】: 雄激素受体(androgen receptor,AR)属于核受体家族中的类固醇受体,是一类配体依赖型的转录因子。核受体家族成员在结构和功能上都具有很高的相似性,它们主要由三个结构域组成:低保守的氨基端结构域(N-Terminus domain,NTD)、高保守的DNA结合域(DNA-binding domain,DBD)以及高保守的羧基端配体结合域(Ligand-binding domain,LBD)。 AR是雄激素发挥作用的介导者,在生物体内有着不可或缺的作用。在多种鱼类,用雄激素处理处于性别分化敏感期的幼鱼能够诱导其性逆转,但本实验室已有的研究表明,雄激素处理不能诱导南方鲇性逆转。为了从分子水平探讨产生这一现象的原因,本实验通过RT-PCR和RACE相结合的方法克隆了南方鲇(Silurus meridionalis)AR的cDNA序列。南方鲇AR cDNA全长3116bp,包括5′端72bp的非编码区(untranslation region,UTR),2415bp的蛋白质编码区(编码804个氨基酸)和3′端629bp非编码区。通过RT-PCR对南方鲇AR的组织表达模式进行了研究,发现它在脑、垂体、鳃、心脏、肝脏、肠、脾脏、肾脏、卵巢、精巢和肌肉中均有表达。另外,我们还克隆了其他7种鲇形目鱼类:鲇(Silurus asotus)、革胡子鲇(Clarias gariepinus)、短尾拟鳞(Pseudobagrus brevicaudatus)、切尾拟鳞(Pseudobagrus truncates)、瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)、长吻鮠(Leiocassislongirostris)、大鳍鳠(Mystus macropterus)的AR的3′端部分序列,并用这些序列构建系统发生树来探讨上述7种鱼类的系统发生关系。 由于鱼类在进化上经历了一次特有的基因组复制,目前普遍认为鱼类具有两个由不同基因编码的AR(ARα和ARβ)。将推导出的南方鲇AR氨基酸序列和已经克隆的其他脊椎动物AR氨基酸序列构建进化树,结果显示:脊椎动物AR可分为三支:四足类的AR、鱼类ARα和ARβ。南方鲇与鲤形目鱼类的AR聚类于ARβ分支。结合对AR已有的研究,我们推测鲤形目和鲇形目鱼类很可能只存在一个有功能的AR,依据如下:1)目前在鲤形目鱼类(斑马鱼、金鱼、黑头软口鲦)和鲇形目鱼类(南方鲇)都只克隆得到了一个AR,且均为ABβ;2)对已经测序完成的斑马鱼基因组进行分析,在其第5号和第14号染色体上均能分离得到一个AR基因,但14号染色体上的AR基因缺失了NTD区,其余部分两者的相似性则高达99%;3)南方鲇AR在所有组织都有表达,这与斑马鱼AR相同,而与其他鱼类两个AR的表达模式均不相同。4)我们根据已知ARα的保守序列设计多对引物,未能在南方鲇克隆到ARα的任何片段。 南方鲇AR与其他脊椎动物AR的多重序列对比结果显示,南方鲇AR具有低保守的NTD区和高保守的DBD、LBD区,这与其他AR相似,但有意思的是,其LBD区比其他所有已分离的AR都多出一部分序列。而产生这一现象的原因是南方鲇AR序列在终止密码子TGA前插入了4个碱基,导致其不能在TGA处终止。对鲇形目的鲇科、鲿科和胡子鲇科的6个属8个种(如前所述)的鱼类AR相应区间的扩增、测序和分析发现,这部分多出的序列普遍存在鲇形目鱼类,且为鲇形目鱼类所特有。对鲇形目鲿科的5种鱼类(短尾拟鲿、切尾拟鲿、长吻鮠、瓦氏黄颡鱼、大鳍鳠)AR部分序列的比较发现,短尾拟鲿、切尾拟鲿和长吻鮠插入的4个碱基及所多出的序列完全一致,而与瓦氏黄颡鱼、大鳍鳠的均不相同。这说明短尾拟鲿、切尾拟鲿与长吻鮠的亲缘关系很近,应属于鮠属。构建的鲇形目鱼类AR的系统进化树进一步证实了这一结果。说明这段多出的序列(衍征)包含了鲇形目鱼类的系统进化信息。 在罗非鱼和虹鳟等硬骨鱼类,用雄激素处理性分化期的幼鱼能通过抑制雌激素合成的关键酶芳香化酶(Cyp19a)的表达而实现性逆转。而用雄激素甲基睾酮(MT)不能诱导南方鲇幼鱼雌性向雄性的性逆转,这与在其他很多鱼类的情况截然不同。为了深入探讨产生这一现象的分子机制,我们对孵化后5天(5dah)南方鲇全雌幼鱼进行MT投喂处理,20天后分离性腺;对南方鲇5月龄幼鱼腹腔注射MT,7天后分离性腺。用半定量RT-PCR检测了MT处理后南方鲇幼鱼卵巢型芳香化酶(Cyp19a)表达水平的变化情况。结果表明,MT处理对南方鲇Cyp19a的表达没有影响。这表明用MT处理不能抑制雌激素的合成,这可能是用MT处理不能诱导南方鲇性逆转的原因之一。那么这是否与南方鲇AR比其他鱼类多出一部分序列有关,还值得进一步研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王庆容,李学英,王大忠;南方鲇16S rRNA基因扩增片段的RFLP研究[J];遵义医学院学报;2004年04期
2 付世建,邓利,张文兵,张耀光,谢小军;南方鲇幼鱼胃和肝脏的组织结构及其在饥饿过程中的变化[J];西南师范大学学报(自然科学版);1999年03期
3 付世建,谢小军,张文兵,曹振东;南方鲇的营养学研究:Ⅲ.饲料脂肪对蛋白质的节约效应[J];水生生物学报;2001年01期
4 单红;周国勤;张其中;;南方鲇Hsc70 cDNA的克隆及序列分析[J];上海水产大学学报;2007年04期
5 况莉,谢小军;温度对饥饿状态下南方鲇幼鱼氨氮排泄的影响[J];西南师范大学学报(自然科学版);2001年01期
6 刘怀如,张耀光;南方鲇消化系统的解剖[J];泉州师范学院学报;2001年06期
7 谢小军,龙天澄, 曹振东;南方鲇的繁殖群体的结构及生长[J];西南师范大学学报(自然科学版);1994年01期
8 张文兵,付世建,曹振东;不同配合饲料对南方鲇幼鱼鱼体组成的影响[J];西南师范大学学报(自然科学版);1999年03期
9 曹振东,谢小军;南方鲇的鱼体能量密度及其预测模型[J];海洋与湖沼;2002年01期
10 刘海防;胡传伟;谢之景;倪长鹏;贾赟;姜世金;张兴晓;杨笃宝;;蓝狐细小病毒的分离鉴定及其VP1基因序列分析[J];兽类学报;2009年01期
11 曹振东,谢小军;温度对南方鲇饥饿仔鱼的半致死时间及其体质量和体长变化的影响[J];西南师范大学学报(自然科学版);2002年05期
12 张波,谢小军;南方鲇的饥饿代谢研究[J];海洋与湖沼;2000年05期
13 邓利,谢小军;南方鲇的营养学研究:I.人工饲料的消化率[J];水生生物学报;2000年04期
14 李先超;;极大节旋藻气囊蛋白基因gvpA克隆与序列分析[J];北京联合大学学报(自然科学版);2008年01期
15 解芳,刘峻,张永莲;雄激素受体的作用机制[J];生物化学与生物物理进展;1999年02期
16 宋平,向筑,潘云峰,胡隐昌,胡珈瑞;南方鲇生长激素完整cDNA的克隆及其DNA序列分析[J];水生生物学报;2002年03期
17 于敏;曲娟娟;郭巍;赵立平;相文华;;猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析[J];中国预防兽医学报;2006年05期
18 刘富强;陈立章;徐巧华;高立冬;张红;;湖南省40株狂犬病毒株N基因的序列分析[J];中国人兽共患病学报;2009年09期
19 谢志雄,杨代淑,熊全沫,郝广勤,吕朝阳;南方鲇线粒体DNA物理图谱及分析[J];水生生物学报;1998年03期
20 刘晓柳,李光千,赵小明;雄性大鼠下丘脑雄激素受体蛋白及其mRNA表达的探讨[J];神经解剖学杂志;2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 邹振芳;杨光;;白鱀豚BDNF基因序列分析及在系统发生分析中的应用[A];中国动物学会兽类学分会第六届会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2004年
2 王耀祖;孙斐;金晓龙;许海敏;;乳房外Paget's病的雌、孕、雄激素受体表达研究[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
3 赵小明;李光千;刘晓柳;范玉华;殷树仪;;雄激素受体和胆碱乙酰化酶在大鼠心内神经节细胞共存的免疫组化研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
4 张秀锦;李小鹰;曹甜甜;叶玲;;雄激素受体CAG重复序列多态性与老年男性冠心病的相关性研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
5 陈实;范金柱;张金康;杨柳;孟国林;刘建;;骨髓间充质干细胞体外成骨诱导过程中雌雄激素受体的表达[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
6 孙晓文;唐悦清;施云峰;韩邦旻;洪艳;李维国;夏术阶;;嵌合分子靶向降解前列腺癌C4-2B细胞表达的雄激素受体[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
7 俞建军;徐月敏;陈嵘;谷宝军;乔勇;金三宝;胡晓雄;;雄激素受体对前列腺癌细胞放疗有效性的评估[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
8 谢作钢;;中老年男子雄激素部分性缺乏综合征(PADAM)研究进展[A];浙江省中西医结合学会生殖医学专业委员会第八次学术年会暨国家级继续教育学习班资料汇编[C];2008年
9 吴赛珠;;睾酮对血管平滑肌细胞中雄激素受体表达调控的研究[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
10 陈炜;喻彬;;RNAi抑制前列腺癌雄激素受体的体外实验研究[A];中华医学会第八次全国男科学学术会议论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘亮伟;木聚糖酶蛋白质序列分析、分子进化和分子模拟[D];江南大学;2005年
2 张纪元;雄激素受体介导的基因调控网络及蛋白磷酸酶2Cκ的进一步功能研究[D];复旦大学;2010年
3 李瑾宜;雄激素在肾结石形成过程中作用的研究[D];第二军医大学;2010年
4 邹惟莹;Trihydrophobin 1促进雄激素受体降解及其在乳腺癌进展过程中作用的研究[D];复旦大学;2010年
5 邹俊杰;系统性红斑狼疮患者雄激素受体基因表达的研究[D];第二军医大学;2000年
6 肖成武;雄激素剥夺对人前列腺癌细胞Egr1表达的影响及其机制研究[D];第二军医大学;2010年
7 徐哲荣;雄激素在血管内皮细胞损伤修复过程中的作用及信号机制研究[D];浙江大学;2012年
8 迟亚云;CDK11~(p58)自身结构功能及其对甾体类激素受体雄激素受体、维生素D受体调控的研究[D];复旦大学;2010年
9 张晓辉;双向氢化酶基因的克隆、分析及其在节旋藻和螺旋藻分子系统学中的应用[D];中国海洋大学;2004年
10 曾锐;A/B同型雄激素受体与前列腺癌关系的研究[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄宝锋;南方鲇雄激素受体(AR)全长cDNA的克隆及分析[D];西南大学;2008年
2 李斌;雄激素受体第一外显子CAG重复序列长度多态性与子宫平滑肌瘤遗传易感性的相关性研究[D];第四军医大学;2004年
3 张中;雄激素对离体大鼠心脏缺血/再灌注心功能及心肌凋亡的影响[D];第四军医大学;2007年
4 崔正慧;睾丸女性化综合征27例临床分析[D];浙江大学;2007年
5 刘长青;雄激素对人单核细胞株THP-1中雄激素受体、细胞间粘附分子1表达的影响[D];第一军医大学;2004年
6 王宇;不同剂量超微化补肾益元中药对运动性低血睾酮大鼠的影响[D];湖南师范大学;2005年
7 张慧娜;姜黄素在前列腺肿瘤细胞LNCaP中对人同源盒基因NKX3.1表达的下调作用[D];山东大学;2005年
8 李小民;前列腺癌细胞阴性雄激素受体逆转的研究[D];郑州大学;2006年
9 胡颜霞;AR和TGF-β1在大鼠多囊卵巢综合征发病机制中的作用[D];郑州大学;2006年
10 邹正;雄激素受体在膀胱移行细胞癌中的表达[D];重庆医科大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张超群 李幼玲 范晓莉;山西医大第一医院研究发现:雄激素受体与再障贫血有关[N];中国医药报;2005年
2 美国纽约罗切斯特大学教授 张传祥;雄激素 膀胱癌研究新目标[N];健康报;2007年
3 白毅;新型雄激素受体调节剂有望治疗前列腺癌[N];中国医药报;2008年
4 陈茂樑 余宁宁;ASC-J9为肌肉萎缩症治疗带来曙光[N];中国医药报;2007年
5 余宁宁 陈茂樑;脊髓性肌肉萎缩症治疗曙光初现[N];健康报;2007年
6 通讯员  余宁宁 陈茂樑 记者  宦建新;姜黄素衍生物使患病老鼠肌肉复原[N];科技日报;2007年
7 指导专家 重庆市第一人民医院皮肤性病科主任 刁庆春 博士 记者 胡长飞;斑秃“青睐”青少年 越紧张掉发越多[N];医药导报;2007年
8 健康时报记者 沙琼 特约记者 向刚尔;后脑勺为何不爱掉头发?[N];健康时报;2008年
9 邹先彪;预防脱发有方法[N];家庭医生报;2008年
10 张中桥;AMCase基因突变体克隆成功[N];中国医药报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978