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反相高效液相色谱法测定南川升麻中阿魏酸和异阿魏酸含量

贾秀山  
【摘要】: 升麻,拉丁学名为Rhizoma cimicifugae,始载于《神农本草经》,主要产于四川、重庆、青海、陕西、云南、东北等地。升麻属(Cimicifuga)植物是毛莨科(Ranunculaceae)升麻族(Cimicifugae S. L.)植物的主要成员,《中国药典》(2005年版)收载的常用中药升麻的原植物有三种:大三叶升麻(Cimicifuga. heracleifolia Kom.)、兴安升麻[Cimicifuga. dahurica (Turcz.) Maxim.]和升麻(Cimicifuga. foetida L.),均在我国分布区域广,资源量大。升麻根茎主要含三萜皂苷类、有机酸类、色原酮类化合物。一般认为有机酸是升麻清热解毒的有效成分,并且以所含的阿魏酸、异阿魏酸为指标控制其质量。近年来研究表明升麻所含三萜皂苷具有抗肿瘤、抑制核苷运转、调节内分泌和神经功能、拮抗钙离子、抑制骨质流失及镇痛消炎等多种生理活性,是一类很有开发前景的天然产物。 南川升麻(Cimicifuga nanchuanensis)是我国特有品种,其根茎入药,又称“绿豆升麻”,是重庆南川金佛山有名的药材。因其分布区十分狭小,加之近年来其生态环境人为破坏较严重,目前已处于濒危状态,被列入国家二级濒危保护植物。对于其濒危的原因和机制,一些学者对其生殖生物学特性和光合生理特征进行了系统的研究。而针对南川升麻中成分含量测定的文献报道较少,目前的报道主要集中于升麻属植物化学成分的研究,对于升麻属植物的研究也主要集中于其药用部位的根茎进行化学成分分析,而对其地上部分研究较少。这对于升麻属植物资源的可持续发展利用相悖,尤其对于处于濒危状态的南川升麻的研究更不可取。《中国药典》2005版一部中使用硅胶G薄层法以异阿魏酸为对照品进行鉴别试验,通过测定异阿魏酸的含量对升麻药材质量进行控制。随着色谱技术的发展,特别是高效液相色谱技术的日臻完善,越来越多的中药材都建立了自己的质量控制标准。因此本研究通过硅胶G薄层色谱法对其进行鉴别,同时采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对其分部位进行测定其异阿魏酸和异阿魏酸含量。在此基础上,研究了南川升麻中各部位于同一地区其他品种间阿魏酸和异阿魏酸含量的差异,同时也对其地上部分与地下部分阿魏酸和异阿魏酸含量进行了对比探讨,从而也为挽救南川升麻的濒危状态提供了一定的参考。主要研究结果如下: 1.通过薄层色谱层析法我们可以直观看出南川升麻各部位中均含有阿魏酸和异阿魏酸,这与其他升麻品种相一致。 2.提取条件:以10%乙醇、30%7乙醇、60%乙醇、80%乙醇为溶剂,分别加热回流和超声处理,测定同一材料,结果表明,60%乙醇加热回流提取180min效果较好。 3.色谱条件:本研究通过试验各种流动相、检测波长以及色谱柱,最终确定素朴条件为:流动相:甲醇:0.1%甲酸(35:65);紫外检测波长:310nm;柱温:35-C;色谱柱:Waters C18(4.6mm×150mm 5um);灵敏度:2.0 AUFS;流速:lml/min;进样量:l0ul。 4.标准曲线的确定:本研究将配置的各浓度对照品,按确定的色谱条件注入液相色谱仪,记录峰面积。分别以阿魏酸和异阿魏酸进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果表明阿魏酸在0.000390625-0.0125mg,异阿魏酸在0.000390625-0.0125mg范围内与峰面积线性关系良好,其回归曲线分别为:y=3551.4x+0.848 R2=0.9976;y=2604.9x+0.6102 R2=0.9987。 5. RP-HPLC测定结果:本研究通过对同一区域采集的3种升麻品种进行测定,结果表明,南川升麻地上部分与地下部分阿魏酸和异阿魏酸含量均高于同区域其他2个品种;南川升麻阿魏酸和异阿魏酸含量在各部位中的含量分别为:叶中阿魏酸含量为0.021414%、异阿魏酸含量为0.110615%;茎中阿魏酸含量为0.011188%、0.148814%;花穗中阿魏酸含量为0.011993%、异阿魏酸含量为0.216306%;块根中阿魏酸含量为0.019105%、异阿魏酸含量为0.855491%;须根中阿魏酸含量为0.019052%、异阿魏酸含量为0.494472%。由此得出以下结论,南川升麻中阿魏酸和异阿魏酸主要集中于地下部分的块根和须根,地上部分的茎、叶、花穗中含量相对较少。


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