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江油附子离体培养的初步研究

李路娥  
【摘要】: 附子(Radix Aconiti Lateralis Preparata)是著名的川产道地药材,原植物为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx,在中医临床中应用较为广泛。近年来,附子由传统的饮片配方,逐步转变成为医药工业原料,全国年需求量较大。因此,实现附子的离体快繁培养及细胞大规模培养生产其药用活性成分,是保证今后市场需求的方法之一。本文以江油附子为材料进行了植株再生、愈伤组织诱导、细胞悬浮培养的研究。植株再生的研究:以附子茎尖、茎段为外植体,在启动培养基MS+6BA2.0 mg.L-1 +NAA0.3mg.L-1上诱导形成无根苗,再诱导生根,其生根培养基为:1/2 MS + IBA 1mg.L-1 +KT 0.5 mg.L-1;以附子须根为外植体,诱导形成愈伤组织,培养基为:MS + KT 1mg. L-1 + 2,4-D 2 mg. L-1 + NAA 0.3 mg. L-1,愈伤组织分化成苗的培养基为:MS+6 BA 2.0 mg. L1 + NAA0.1 mg. L-1 +2,4-D1 mg. L-1,增殖培养基为:MS+6 BA 2.0mg.L1+ NAA 0.1mg.L-1,生根培养基为:1/2 MS + IBA 1mg.L-1 +KT 0.5 mg.L-1。愈伤组织诱导的研究:采用不同外植体进行愈伤组织的诱导,结果表明附子须根是诱导疏松愈伤组织的最佳外植体,在MS+ 6-BA 2.0 mg.L-1+ NAA 0.3 mg.L-1+ 2,4-D 1.0 mg.L-1培养基上诱导形成愈伤组织,经多次继代培养获得了疏松的愈伤组织,为下一步的细胞培养实验奠定了基础。细胞悬浮培养的研究:取疏松愈伤组织在MS+6 BA 2.0 mg. L1+NAA 0.1 mg. L-1 +2,4-D 1.0 mg.L-1液体培养基中进行细胞悬浮培养,获得了附子细胞悬浮系,并建立了悬浮细胞生长动态曲线。通过酸性比色染料法在细胞悬浮培养物中检测到乌头碱,具有产业化应用前景。


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