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两株产甾体皂甙华重楼内生细菌的筛选与发酵条件的研究

任智  
【摘要】: 从华重楼(Paris polyphylla var Chinensis)的新鲜块茎中分离得到107株内生菌。对这107株菌进行了液体培养,经TLC初步检测鉴定,有多株菌产生甾体皂甙或其类似物。本文对其中2株菌进行了研究,编号分别为RZ03和RZ07。根据薄层检测结果,菌株次生代谢物与重楼总皂甙有显色相同、迁移率相当的层析带,初步表明其可能产生重楼甾体皂甙,并进一步证明其中水解后含有薯蓣皂甙元,需进一步研究菌株产生何种甾体皂甙及其是否具有重楼药用活性。 根据其形态及生长特征和生理生化特征,参照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版),初步鉴定RZ03是肠杆菌科(Enterobacteriaceae)细菌,RZ07是芽孢杆菌属(Bacillus)细菌。经TLC筛选检测,菌株RZ03和RZ07可产生薯蓣皂甙。进行了形态和生理生化鉴定并将菌株的16S rDNA序列分别为用Blastn调出GenBank+EMBL+DDBJ中同源序列,ClustalW绘制系统发育树,RZ03与DQ019167(Exiguobacterium acetylicum)同源性为99 % ,鉴定为Exiguobacterium acetylicum RZ03;RZ07与调出的DQ207730(Bacillus subtilis)序列同源性为99%,初步鉴定为Bacillus subtilisRZ07。 对RZ03的发酵产物进行了初步的抗菌活性及发酵条件研究,结果表明: (1)最适发酵培养基组成为:15%土豆汁,3%麸皮汁,2.5%蔗糖,0.15% MgSO_4·7H_2O,0.3%KH2PO4。 (2)最适发酵条件为:发酵周期6-7天,温度35℃,发酵培养基的起始pH5.0-6.0 ,发酵培养基装量100-120ml/500m1三角瓶,摇床转速120-160r/min,最适接种量10%-5% (v/v)。 (3)热稳定性测定表明:所含活性物质不耐热,但有少量耐热成分。


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