布拉氏酵母菌干预急性肝衰竭小鼠肠道菌群机制研究

【摘要】：目的:拟利用分子生物学方法深入探索肝衰竭时肠道菌群的变化,并采用布拉氏酵母菌干预肝衰竭时肠道菌群的变化,探讨其缓解肝衰竭的可行性。方法:选雄性健康BALB/C小鼠,试验设计如下:1)正常对照组(K组);2)急性肝衰竭组(M组);3)布拉氏酵母菌对照组(G组);4)布拉氏酵母菌预防组(H);5)布拉氏酵母菌治疗组(I组)。注射D-氨基半乳糖复制急性肝衰竭模型,注射36hr后处死小鼠,取血液和肝脏样品。采集小鼠血检测ALT,AST,TBiL,PTA,解剖切取小鼠肝脏做HE染色,取小鼠口腔、胃、结肠、回肠盥洗液,粪便,使用illumina高通量测序仪测定16S rDNA做细菌多样性分析,采集肝组织做RNA-seq转录组测序。结果:1、肝衰竭小鼠与健康对照小鼠消化道菌群存在明显差异,以回肠差异最为明显,肝衰竭小鼠肠道菌群多样性明显降低,在门水平拟杆菌增多、厚壁菌门、变形菌门减少。2、布拉氏酵母菌能增加肠道菌群多样性,促进丙酸杆菌、毛螺菌科等的生长,能抑制S24-7、理研科菌等生长。3、表达谱功能富集分析表明,布拉氏酵母菌引起表达基因变化主要涉及细胞凋亡、炎症反应、自身免疫及与胆固醇运输相关信号通路。富集的信号通路中TGF-beta信号通路鲜见与肝衰的相关性报道,通过对其介导的分子信号分析发现,布拉氏酵母菌可下调TGF-beta/Smad基因表达和蛋白质生成。结论:急性肝衰竭时肠道菌落发生显著改变,尤其在回肠部,布拉氏酵母菌可通过调节肠道菌群和抑制TGF-beta、Smad2、3、8的mRNA及蛋白质表达,从而缓解D氨基半乳糖所致的肝衰。