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微囊化人胃癌细胞培养模型建立及实验研究

范学军  
【摘要】:目的:建立微囊化人胃癌细胞系SGC-7901培养模型,并检测人胃癌细胞在微囊微环境下生长及相关基因表达的情况。 方法:常规贴壁培养人胃癌细胞系SGC-7901,使用微胶囊制备仪制备微囊化胃癌细胞,通过MTT比色法记录微囊化人胃癌细胞生长曲线和上清乳酸葡萄糖测量法记录代谢时相变化曲线,观察微囊化人胃癌细胞的生长和代谢特性;取生长第7、14、21天的微囊化人胃癌细胞HE染色观察和免疫细胞化学法检测BrdU、VEGF和PCNA基因表达,平面培养细胞做对照。 结果:倒置显微镜下观察人胃癌SGC-7901细胞微囊化后48-72 h内聚集成团状,培养至14天,细胞团直径可达300μm左右;MTT结果示培养至第14天,细胞相对数不再增加,随着天数的增加,细胞相对数略下降;葡萄糖检测示微囊化人胃癌细胞不断消耗葡萄糖,至20天后葡萄糖值低至10mmol/L;乳酸检测示微囊化人胃癌细胞产生大量乳酸,至20天后达到100mmol/L水平。免疫细胞化学法检测PCNA和VEGF基因在贴壁培养SGC-7901细胞中表达;微囊化人胃癌细胞培养至第7和14天时,可见PCNA、BrdU及VEGF基因表达;当培养至21天时,可见PCNA和BrdU主要在细胞团外层表达,内层细胞则表达少或不表达,而VEGF均见表达。 结论:本实验首次建立了微囊化人胃癌细胞培养模型,微囊化后细胞三维立体方式生长和代谢情况良好,微囊化前后相关基因表达也较稳定,为今后研究人胃癌细胞与宿主微环境之间的作用关系提供了平台。


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