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遵义及周边地区结膜吸吮线虫的形态学观察和遗传变异研究

任小红  
【摘要】:目的:通过收集遵义及周边地区结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda,T.cp)人体感染标本,对其进行病例资料分析、形态学观察和遗传变异研究,初步获得遵义及周边地区结膜吸吮线虫病的流行特征,了解遵义及周边地区T.cp形态特点及种间和种内进化关系,不仅为遵义及周边地区结膜吸吮线虫病的防治提供依据,也为丰富T.cp基因组序列信息奠定基础。方法:1、遵义医学院附属医院、遵义市航天医院眼科采集T.cp感染者成虫标本,获得感染者病例资料;2、光学显微镜和扫描电镜下观察T.cp雌、雄虫形态特征和超微结构;3、HE染色法观察T.cp雌、雄虫横切和纵切组织结构特征;4、利用试剂盒提取遵义及周边地区不同来源地虫体DNA,分别进行18S r RNA、cox1两个基因的PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳检测;5、对PCR产物进行测序,利用Clustal X 1.83进行比对,并用MEGA 7.01软件基于最大似然法(ML)进行遗传进化分析。结果:1、病例资料分析结果显示遵义及周边地区T.cp人体感染病例为散发,病例近年逐渐增多,每年8~11月为高发期;感染者集中在35~60岁;女性多于男性;以农村患者居多,其中正安县病例最多,约1/3患者家中养有狗、猫。2、遵义及周边地区人体感染T.cp形态特征与其他地区虫体基本相同;扫描电镜下观察遵义及周边地区T.cp超微结构与其他地区虫体存在一定差异,遵义及周边地区T.cp口囊底部有两块半月形的咽门结构,成虫尾部腹面末端1对尾乳突上未观察到有新月形开口。3、HE染色结果显示T.cp体表结构为锯齿状皱褶,为多肌型线虫;体壁由角皮层、皮下层和纵肌层组成,体内有消化系统、生殖系统等。4、遵义及周边不同地区(正安县、绥阳县、桐梓县、习水县等)T.cp 18S r RNA基因序列同源性为99%~100%;遵义及周边地区多数样本18S r RNA基因与日本Oita(AB538282.1)样本同源性为100%,系统发育分析显示同在一个分支。5、遵义及周边不同地区T.cp样本cox1基因同源性为98%~100%,与罗马尼亚(KP087796.1)、日本Oita(AB538283.1)样本等其他地区cox1基因同源性为95%~98%。系统发育分析显示正安1号与日本Oita(AB538283.1)在一个分支;习水等遵义及周边地区多数样本的cox1基因与遵义市区2号、正安(2、3)号之间的亲缘关系较近;遵义市区1号则与罗马尼亚(KP087796.1)、塞尔维亚(KJ433983.1)样本序列在同一分支。结论:1、遵义及周边地区T.cp人体感染病例为散发,近年逐渐增多;2、遵义及周边地区T.cp虫体的形态特征与其他地区基本一致,但扫描电镜下有一定区别;3、18S r RNA基因同源性高,可以作为T.cp有效检测基因;cox1基因则存在一定的种内和不同地域差异,可作为T.cp种群遗传变异的有效分子标记。


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1 任小红;遵义及周边地区结膜吸吮线虫的形态学观察和遗传变异研究[D];遵义医学院;2016年
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