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苗药组方熏洗对家兔早期膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡与增殖影响的实验研究

肖会  
【摘要】:目的:探讨苗药熏洗疗法对实验性家兔早期膝骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖的作用及机制。 方法:采用兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造KOA模型,经苗药熏洗治疗20天后,肉眼、光镜下观察软骨组织的病理改变,并用Mankin法进行评分;亚硝酸盐还原酶法检测关节液的NO水平;流式细胞仪检测软骨细胞的凋亡指数(AI);免疫组织化学法检测膝关节软骨Bax、Bcl-2水平。 结果:(1)肉眼观察模型组可见到关节软骨表面的改变;(2)在光镜下可观察到:正常组:关节软骨4层结构清晰,软骨面光滑、完整,软骨细胞排列整齐,柱状层的软骨细胞呈柱状排列,其下方为潮线,中间层的软骨细胞呈无序、散在排列,表型为圆形。基质染色均匀,表层的软骨细胞近似呈水平排列,表型呈梭形。模型组:关节软骨4层结构破坏严重,表面不平滑,呈网格状硬化,有的表层缺如,软骨近乎完全消失,被增生的纤维结缔组织代替,滑膜部分呈结节样增生,软骨细胞减少,软骨下骨暴露,骨赘形成,血管增生明显,潮线不完整或消失。熏洗组:关节软骨4层结构层次清晰可辨,软骨破坏明显减轻,软骨表面较规则、光滑、完整,细胞排列规则,潮线清楚。表层细胞排列轻度紊乱或见轻度变形,中层和深层未见改变,软骨下骨骨小梁密度变化不明显。清水组:关节软骨4层结构层次尚可辨,软骨表面粗糙,稍不平整,部分表层细胞缺失,未见中层和深层改变,软骨细胞呈现弥漫性增生,潮线模糊,甚至可见到双重潮线;(3)各组Mankin's评分结果显示:与正常组比较,模型组的Mankin's评分升高了,具有极显著性差异(P0.01),与模型组比较,各治疗组Mankin's评分均降低了(P0.05),且苗药熏洗组具有极显著性差异(P0.01),苗药熏洗组与清水组比较,差异无统计学意义(P0.05);(4)Annexin v/PI双参数法的检测结果显示:正常的软骨细胞也存在凋亡,与造模组比较,明显低于模型组(P0.01),苗药熏洗组与造模组比较有明显差异(P0.05)。清水组与造模组比较,无统计学差异(P0.05);(5)苗药熏洗对KOA模型家兔关节液NO的影响的结果显示:模型组家兔关节液NO浓度较正常组显著。与正常组比较差异有显著统计学意义(P0.01),苗药熏洗组关节液NO浓度降低,与模型组比较差异有显著统计学意义(P0.01),苗药熏洗组与清水组比较,差异有统计学意义(P0.05);(6)正常组有少量Bcl-2阳性细胞的表达;模型组及治疗组表达明显,与正常组比有极显著性差异(p0.01);各治疗组中的表达率较模型组升高(p0.05),其中熏洗组具有极显著性差异(p0.01),苗药熏洗组与清水对照组比较,之间有显著性差异(p0.05);(7)Bax在正常组有少量表达,造模及治疗后明显增加,与正常组比较,模型组、苗药熏洗组及清水对照组均有极显著性差异(p0.01),与模型组比较,各治疗组有显著差异(p0.05),苗药熏洗组与清水对照组比较,之间有显著性差异(p0.05)。 结论:苗药熏洗疗法可以抑制膝骨关节炎软骨细胞的凋亡,改善软骨的病变;其作用途径可能和抑制软骨炎症、减少NO释放、降低软骨细胞的凋亡指数、促进Bcl-2水平的表达、抑制Bax水平的表达有关。现代药理研究已经证实,该实验用苗药验方有较好的镇痛、抗炎及抗菌作用,这可能是苗药熏洗改善软骨炎症的作用机制之一。且各种药物联用能改善微循环,这些作用可能通过抑制炎症因子释放、消除自由基损伤、改善骨内微循环、促进软骨基质合成来抑制软骨细胞凋亡,改善软骨病变。


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