尖刀唇石斛化学成分及降脂活性天然产物研究

【摘要】：本论文主要包括两个方面的内容,一方面是尖刀唇石斛(Dendrobium heterocarpum Lindl)正丁醇部位化学成分的分离鉴定,另一方面是酚性成分与尖刀唇石斛中化学成分的生物活性研究。首先,对当前发现具有潜在减肥活性的化合物及其机理进行简单的综述。其次利用硅胶柱层析、Diaion HP20SS反相材料、凝胶排阻色谱Sephadex LH-20以及高效液相色谱等各种分离手段对尖刀唇石斛正丁醇部位进行了提取分离,并通过分析波谱数据对其中的化学成分进行了鉴定,从该部位分离鉴定9个已知化合物和1个新化合物。再者利用前脂肪细胞3T3-L1,对课题组前人已分离出的21个酚性成分和从尖刀唇石斛正丁醇部位分离鉴定的质量大于1毫克的9个分子共30个分子进行了前脂肪细胞的增殖能力检测,最终发现了 9个单体化合物可以阻止前脂肪细胞的增长与繁殖(p0.05),其中化合物23效果最佳(p0.0001),接着对这9个分子进行了 3T3-L1细胞的分化能力检测,没有发现可以阻止其分化的化合物;最后对其中活性最为显著的化合物23进行Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI染色,通过Western Blot蛋白印记实验检测前脂肪细胞中ERK1/2蛋白表达情况,实验结果表明化合物23可以引起3T3-L1细胞的凋亡同时降低其中总的和磷酸化的ERK1/2蛋白的表达量。另外对可以抑制前脂肪细胞增殖的化合物21即芒果苷用C57BL/6J小鼠进行了体内降脂减肥活性实验探索。按照芒果苷50 mg/kg/d和200 mg/kg/d的剂量对小鼠采用灌胃的方式给药,实验结束后检测小鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、瘦素水平,结果表明芒果苷可以使C57BL/6J小鼠体重下降,降低其血清内TC、LDL、瘦素的浓度;通过Western Blot蛋白印记实验检测经过芒果苷不同浓度(10μM～60μM)刺激48h后3T3-L1内ERK1/2蛋白表达水平,结果显示芒果苷(10μM)可以抑制3T3-L1中磷酸化的ERK1/2蛋白的表达。以上实验事实表明芒果苷具有降血脂活性和减肥活性,同时可能是通过降低小鼠血清中TC、LDL-C、瘦素的水平以及3T3-L1细胞内磷酸化的ERK1/2蛋白的表达来发挥作用的。最后对本论文各个部分的实验进行总结。