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云南野生虎掌菌多糖的提取及其抗氧化研究

王雪冰  
【摘要】:利用热水、碱液、酶(纤维素酶、蛋白酶)辅助、超声波辅助、微波辅助等5种方法提取虎掌菌多糖。应用响应曲面法优化在提取率和提取条件上具有优势的两种方法的工艺条件;利用单因素法探寻了沉淀虎掌菌多糖的最佳浓缩比和乙醇终浓度:研究了Sevage和TCA两种方法脱蛋白的工艺条件;采用气相色谱法对提取的虎掌菌多糖的单糖组成进行分析,对比标准单糖样品的出峰时间确定单糖种类,确定所含单糖摩尔比;从4个方面评测了虎掌菌多糖的抗氧化能力:还原力,清除羟基自由基能力,清除DPPH自由基能力,抗脂质体氧化能力,评价虎掌菌多糖是否具有作为抗氧化剂的可能。 试验表明:热水提取法、碱液提取法、纤维素酶和蛋白酶辅助提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法的多糖提取率分别为:9.01%、17.17%、20.08%和19.48%、17.80%、16.92%;其中纤维素酶辅助提取法和超声波辅助提取法在提取条件和多糖提取率上都具有优势。纤维素酶辅助提取法经响应曲面法优化的最优工艺条件为:酶加量610 U/g,酶解温度为48℃,pH为5.2,水料比为40:1(mL:g),酶解时间1 h,水浴提取温度90℃,水浴提取时间2 h。在此条件下虎掌菌多糖提取率可达20.10%。响应曲面法优化的超声波辅助提取法最优工艺条件为:超声时间31 min,水料比为21:1(mL:g),水浴提取温度为70℃,时间2 h,实际测得虎掌菌多糖的提取率为17.88%。利用单因素法探寻虎掌菌多糖的沉淀最佳工艺参数为:浓缩比4:1,乙醇终浓度为70%时,多糖沉淀率最高。Sevage法脱蛋白的最佳工艺条件为:样液与Sevage试剂体积比为4:1,Sevage试剂中氯仿与正丁醇的体积比为5:1,脱蛋白次数为4次,此条件下蛋白脱除率为50.15%,多糖回收率为77.45%。TCA脱蛋白最佳条件为TCA浓度5%,脱蛋白处理2次,蛋白质脱除率可达44.75%,多糖回收率85.46%。气相色谱法分析虎掌菌多糖的单糖组成实验结果表明虎掌菌多糖水解后含有阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为:0.8:4:13.4:3.4。虎掌菌多糖具有还原能力,但没有Vc的还原能力强。清除羟基自由基的能力较强,试验最高浓度(3.6 mg/mL)的虎掌菌多糖羟基自由基的清除率可以达到52.27%。虎掌菌多糖清除DPPH自由基的效果好,最高浓度的虎掌菌多糖DPPH清除能力可达到73.16%。抗脂质体氧化能力并不理想,最高浓度的虎掌菌多糖对脂质体氧化的抑制率也只达到了34.15%。虎掌菌多糖具有开发成为具有保健功能的新型保鲜剂的可能,对食品保鲜材料的研究提供了另一种途径。


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