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黑脉羊肚菌中PPO、POD、SOD三种酶的性质研究

张丽  
【摘要】:本文以黑脉羊肚菌为研究对象,对其子实体中多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)三种酶的酶学性质进行研究,重点对子实体中SOD提取效果的影响因素及酶学性质进行考察,旨在为黑脉羊肚菌的开发利用提供参考依据。同时实验进一步对液体培养黑脉羊肚菌胞外产SOD的培养条件进行了探讨,并考察了激素和金属离子对胞外产SOD的影响,了解发酵法制备SOD,为今后生产奠定必要的技术基础。获得主要的试验结果如下: (1)以邻苯二酚为底物,黑脉羊肚菌中PPO的Km,和Vmax分别为2.996mmol/L、0.155U/min,以愈创木酚为底物,黑脉羊肚菌POD的Km和Vmax分别为0.0202mmol/L、0.1045U/min。以邻苯三酚为底物时,黑脉羊肚菌中SOD的Km和Vmax分别为0.708mmol/L、1.86U/min, PPO、POD、SOD三种酶的最适反应温度分别为30℃、40℃、30℃,最适反应pH值分别为7.5、6.5、8.0,且三种酶中SOD的酶活性和热稳定性、pH稳定性均显示较好。三种抑制剂(抗坏血酸、亚硫酸氢钠、柠檬酸)对PPO、POD的抑制作用差别很大。十二烷基磺酸钠(SDS)、H2O2、柠檬酸抑制剂对黑脉羊肚菌SOD活力也有不同程度的抑制作用。 (2)黑脉羊肚菌子实体中SOD提取效果最好的单因素条件为:料液比1:30、提取时间4h、提取液pH7.8、提取液离子强度为150mmol/L,粗提后的SOD经热击法和硫酸铵分级沉淀进行初步纯化,得到SOD-A,其显示了良好的热稳定性和pH稳定性,Mn2+对其显示明显的激活作用,而Fe2+则对其具有非常明显的抑制作用,经敏感性实验测定判断黑脉羊肚菌中的SOD属于Mn-SOD类型。 (3)黑脉羊肚菌发酵培养过程中,最适菌丝体生长的培养条件为温度28。C,初始pH7,培养时间9d,而最适产酶的培养条件为温度20℃、初始pH5.5,培养时间5d,添加激素吲哚乙酸(IAA)和金属离子Cu2+、Zn2+、Fe2+、Mn2+对黑脉羊肚菌发酵培养产胞外SOD以及菌丝体生长有一定的影响,IAA添加浓度为1.0μg/mL时,菌丝体重量最大为14.03g/L,浓度为2.5μg/mL时,相对酶活性达到最高。低浓度的Mn2+对菌丝体生长和胞外SOD活性起到了促进作用。


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