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不同放射活度~(125)I粒子对人中分化胃癌细胞株(AGS)敏感性的体外实验研究

李勇  
【摘要】:目的:探讨不同放射活度125I粒子对人中分化胃癌细胞株(AGS)的敏感性表达的影响及其对胃癌细胞凋亡的影响,从增殖与凋亡两方面探讨125I粒子治疗人中分化胃癌有效性的分子生物学机制。方法:将9粒Model BT-125-Ⅰ型125I粒子建立体外照射装置,其中8粒均匀分布在直径30mm的圆周上,另1粒放置在圆心。以人胃癌细胞株(AGS)细胞种植于直径为35mm的培养皿内,将指数生长期的细胞放在粒子平面上方及下方各5mm处接受不同放射活度125I粒子照射。分为4组:对照组A(未接受照射)三组实验组(实验组B125I粒子放射活度为0.4mCi),实验组C125I粒子放射活度为0.6mCi,实验组D125I粒子放射活度为0.8mCi),培养细胞24小时、48小时、72小时。分别收集各组标本并冻存。透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的改变;用流式细胞仪pI法测细胞周期再分布;Tunel法检测肿瘤细胞原位凋亡情况;实时荧光定量RT-PCR法从核酸水平检测在不同时间点上胃癌细胞中的Bax基因及survivin基因的表达水平。结果:透射电镜示:各实验组可见早中晚期凋亡细胞,对照组肿瘤细胞少见细胞凋亡。流式细胞术PI法检测各实验组肿瘤细胞周期被阻滞在Go/G1期。S期、G2/M期细胞比例逐渐降低。Tunel染色法检测肿瘤细胞原位凋亡情况,各实验组之间的凋亡率在相同时间点24h、48h、72h及各实验组内不同时间点的差异均有统计学意义(P值均0.05),48小时开始各实验组间的差异显著。通过实时荧光定量RT-PCR检测:证实不同剂量持续照射后,实验组人中分化胃癌细胞(AGS)中SurvivinmRNA表达逐渐下调,BaxmRNA表达逐渐上调。且各实验组凋亡率增加、SurvivinmRNA表达下调及BaxmRNA表达上调均有时效性及剂量依赖关系。结论:1.不同放射活度125I粒子照射人胃癌细胞株(AGS)均可抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。2.不同放射活度125I粒子抑制人胃癌细胞株(AGS)重要的分子生物学机制可能与其使细胞周期阻滞在G0/G1期,下调凋亡抑制基因survivin表达,上调促凋亡基因Bax的表达有关。3.不同放射性活度125I粒子对人中分化胃癌细胞株(AGS)的敏感性存在差别,具有剂量依赖性。


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