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~(125)I粒子体外照射联合EGFR抑制剂对人胃癌细胞凋亡作用及对Bcl-2/Bax表达影响的实验研究

李巍伟  
【摘要】:目的研究125I粒子连续体外照射联合表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor, EGFR)抑制剂(cetuximab, C225)对低分化人胃癌细胞(MNK-45)的促凋亡作用及对凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的影响,初步探讨二者联合治疗胃癌的效果与机制。 方法体外培养人胃癌细胞(MNK-45),实验共分对照组与三个实验组包括:单纯药物组、单纯照射组、照射与药物联合作用组。单纯药物组与联合作用组细胞预先经2000ug/ml C225干预。选取放射活度0.4mCi的125I粒子建立体外照射装置,对单纯照射组和联合作用组细胞进行持续照射,空白对照组与单纯药物组细胞则处于相同装置中未接受125I粒子照射。72小时后收集各组细胞,以细胞计数分析各组细胞生长增殖情况;用透射电子显微镜观察肿瘤细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞凋亡率与细胞周期改变;RT-PCR检测各组细胞Bcl-2基因及Bax基因的表达水平。 结果1.细胞生长计数分析结果示:72小时后各实验组细胞同期细胞数较对照组均减少(P0.05),且联合作用组细胞计数低于单纯照射组与单纯药物组(P0.05);2.透射电镜观察结果示:各实验组均可见早中晚期凋亡细胞,而对照组肿瘤细胞鲜见细胞凋亡;3.凋亡率检测结果示:各实验组细胞凋亡率均较对照组明显增加(P0.05),其中联合作用组细胞凋亡率均显著高于单纯照射组与单纯药物组(P0.05);细胞周期检测结果示,各实验组较对照组均出现Go/G1期细胞比率增高与S期细胞比率下降(P0.05),且分别与单纯药物组和单纯照射组比较,联合作用组细胞该现象均强于二者(P0.05);4. RT-PCR检测示,各实验组细胞较对照组均有不同程度的Bcl-2表达减弱,Bax表达增加、以及Bcl-2/Bax比值降低(P0.05),且分别与单纯药物组和单纯照射组比较,联合作用组细胞上述表现得最为明显(P0.05)。 结论1.125I粒子持续照射联合C225可明显抑制人胃癌细胞增殖、促进细胞凋亡,其作用优于单独应用125I粒子或单独应用C225。 2.125I粒子持续照联合C225可显著增强对人胃癌细胞的凋亡诱导并导致细胞周期再分布,该效应强于单独应用125I粒子或单独应用C225。 3.125I粒子持续照射与C225联合应用可进一步下调Bcl-2,上调Bax基因表达,降低细胞内Bcl-2/Bax比值。


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