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左卡尼汀对环磷酰胺致大鼠睾丸损伤的保护作用及机制研究

曾鹏  
【摘要】:[目 的]1.探究环磷酰胺(CP)导致大鼠睾丸损伤和影响精子发生的作用和机制;2.探究左卡尼汀(LC)对CP致大鼠睾丸和精子发生损伤的保护作用及机制。[方 法]将72只8周龄体重约250g雄性大鼠随机分为三组:生理盐水组(NS组),环磷酰胺组(CP组),环磷酰胺+左卡尼汀组(CP+LC组)。NS组每天腹腔注射生理盐水1ml;CP组每天腹腔注射CP 30 mg/kg;CP+LC组每天腹腔注射CP 30 mg/kg,一小时后再腹腔注射LC 100 mg/kg;上述三组均连续注射5 d。注射药物后分别在3 d、1 w、2 w、4 w四个时间点取材,期间记录大鼠活动情况和体重,取材时记录大鼠睾丸重量。采用HE染色观察大鼠睾丸曲细精管和间质细胞变化;采用免疫组化和免疫荧光染色方法观察大鼠睾丸中PP2A、SET、β-catenin的免疫反应阳性表达;采用Western blot方法检测PP2A、SET、β-catenin的蛋白表达变化,采用Q-PCR检测基因mRNA表达变化,ELISA测定大鼠血清睾酮含量。应用SPSS 22.0对数据进行单因素方差分析分析以及SNK和LSD-t检验进行方差分析后将多组资料两两比较,以P0.05为差异有统计学意义。[结 果]1、CP组:与NS组比较,CP组大鼠活动明显减少,大鼠体重和睾丸重量明显降低,血清睾酮含量明显降低;HE染色发现大鼠睾丸曲细精管管径变小,生精上皮结构紊乱,生精上皮中不同阶段生精细胞排列稀疏,各级生精细胞均有不同程度缺失,以精子细胞减少为主;免疫组化和免疫荧光显示曲细精管中精原细胞、初级精母细胞、支持细胞以及睾丸间质细胞中均存在PP2A、SET、β-catenin 的表达,PP2A 和 β-catenin 蛋白表达明显升高(P0.05),SET蛋白表达明显下降(P0.05);Q-PCR和WB实验显示CP组PP2A和β-catenin的mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05),而SET的mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05)。2、CP+LC组:相比于CP组,CP+LC组大鼠活动增加,体重无明显差异,睾丸重量明显增加,血清睾酮含量明显增加;HE染色发现大鼠生精上皮结构有所恢复,生精上皮中不同阶段生精细胞部分恢复,精子细胞数量有一定恢复;免疫组化和免疫荧光染色显示曲细精管中精原细胞、初级精母细胞以及睾丸间质细胞中PP2A、SET、β-catenin的表达,CP+LC组PP2A和β-catenin蛋白表达明显下调(P0.05),SET蛋白表达明显上调(P0.05);Q-PCR和WB实验显示PP2A和β-catenin的mRNA和蛋白表达明显下调(P0.05),而SET的mRNA和蛋白表达明显上调(P0.05)。相比于NS组,CP+LC组体重明显降低,睾丸重量稍有降低,睾丸占体重比值升高(P0.05),血清睾酮含量无明显差异。HE染色显示精子细胞数量仍不及NS组。PP2A和β-catenin的mRNA和蛋白表达无明显差异,SET的mRNA和蛋白表达高于NS组(P0.05)。[结 论]1.CP通过SET和β-catenin信号通路对大鼠睾丸造成损伤,损害精子发生。2.LC可保护CP所致大鼠睾丸损伤和精子发生障碍,可能通过SET和β-catenin信号通路发挥保护作用。


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