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新生SD大鼠心肌细胞培养方法的研究

姜雪松  
【摘要】:目的 探讨SD大鼠心肌细胞培养的适宜条件及传代培养条件,并收集心肌细胞的代谢液,为将来建立胚胎干细胞条件培养基提供必要条件。方法采用二种方法。(一)消化法:用消化酶先将心肌组织解离成单个细胞,经差速贴壁后,放入六孔培养板中,加阿糖胞苷(抑制成纤维细胞等非心肌细胞的生长),在5%CO_2、37℃、饱和湿度的环境中培养、传代。在实验过程中,比较不同消化酶、消化时间、差速贴壁时间、阿糖胞苷剂量等因素对心肌细胞培养的影响。(二)组织块法:将心肌组织剪碎为1mm~3左右的碎块,接种于六孔培养板中,加阿糖胞苷(抑制成纤维细胞等非心肌细胞的生长),在5%CO_2、37℃、饱和湿度的环境中培养、传代。在培养过程中,比较不同剂量的阿糖胞苷对大鼠心肌细胞的作用效果。收集大鼠心肌细胞代谢液。结果(一)消化法:用Ⅱ型胶原酶消化后的初生SD大鼠的存活心肌细胞数(915.40±19.66)与胰蛋白酶消化后的存活心肌细胞数(697.90±17.35)相比有显著性差异(P=0.000),说明Ⅱ型胶原酶对心肌细胞的损伤较小;比较胶原酶消化5min、15min、30min对心肌细胞存活的影响时,发现用胶原酶消化5min较好(P=0.000);在加入不同剂量(分别为0μl、20μl、50μl、100μl)阿糖胞苷的对比实验中,结果说明以加20μl阿糖胞苷组的大鼠心肌细胞培养效果较好(P=0.000):差速贴壁30min组和60min组的实验效果比15min组要好(P=0.000),而差速贴壁30min组和60min组之间无差异(P=0.082)。(二)组织块法:发现不同剂量(分别为0μl、20μl、100μl)阿糖胞苷对组织块的生长均有影响(P=0.000),其中不加阿糖胞苷组的组织块生长较快。实验结束时共收集心肌细胞代谢液200ml。结论 消化法中,用Ⅱ型胶原酶每次消化5min,差速贴壁30—60min,加入20μl阿糖胞苷的大鼠心肌细胞培养效果为佳;为抑制成纤维细胞等非心肌细胞的生长,组织块法中亦应加阿糖胞苷20μl为宜。


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