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光化学诱导树鼩脑血栓形成后海马BBB通透性及缺血微环境动态变化的研究

唐代彬  
【摘要】:目的:观察树鼩局部脑缺血后4h、24h、72h缺血侧与缺血后24h对侧海马血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性及神经元微环境的变化,探讨脑缺血时海马BBB损害与缺血微环境变化的相互关系,为阐明缺血条件下海马神经元继发性损伤的可能机制提供新的依据。方法:建立光化学诱导树鼩皮层脑缺血模型,使用异硫氰基荧光素葡聚糖(分子量 70K Dalton,fluorescein thiocarbamoyl dextrans,FITC-D-70K)作示踪剂为检测BBB通透性,利用单泵等速微灌流系统(single-pumped push-pull perfusing system,SPPPPS)借助人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,aCSF)对缺血后不同时点海马神经元微环境进行微灌流,留取灌流液同时采集血浆标本。利用离子分析仪及血气分析仪分别检测灌流液离子和血气参数;使用荧光分光光度仪检测灌流液及血浆中FITC-D-70K浓度,计算aCSF经BBB对FITC-D-70K的单位血浆清除率(Clearance rate of FITC-D-70K,Cf),并将其作为BBB通透性的判断指标;用高效液相色谱(high performance liquid chromatography HPLC)技术检测灌流液中谷氨酸(glutamate acid,Glu)和γ-氨基丁酸(gamma-Aminobutyric acid,GABA)的含量;计算缺血后各时点的中风指数(stroke index,S1)及星形胶质细胞活化指数(astrocyte activity index,AAI);利用电子显微镜观察了缺血后24h患侧海马的形态变化。结果:脑血栓形成后,缺血同侧海马BBB通透性于缺血后4h开始升高,24h达到高峰(0.526±0.130ul,P0.01);微环境内Glu含量在4h时显著降低(1.72±0.20umol.L~(-1),P0.05),随后上升,以24h最为明显(5.71±0.39umol.L~(-1),P0.01);GABA含量于各时间点均上升,24h最高(3.8104±0.14umol.L~(-1),P0.01);缺血后4h及24h微环境Na~+含量降低,以4h为著(144.38±7.14mmol.L~(-1),P0.01);K~+含量于4h和72h


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