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HSP70多肽复合物的纯化及激活的DC疫苗抗胰腺癌体内外实验研究

张晓娟  
【摘要】: 目的:探讨从胰腺癌肿瘤块中分离纯化热休克蛋白70-多肽复合物(heatshock protein 70-polypeptide complexes,HSP70-PCs)的方法,研究使用HSP70多肽复合物构建树突状细胞(dendritic cell,DC)多肽疫苗,观察其在体外对CTL的增殖和活化效果。并进行免疫治疗荷瘤小鼠,观察小鼠的肿瘤大小及存活期。 方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PCs,所得蛋白经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,Bradford法测定蛋白浓度,计算获得率。用提纯的HSP70-PCs激活小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte response,MLR)中HSP70-PCs致敏DC对CTL的增殖及活化效果;并观察DC诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对肿瘤细胞的特异性杀伤活性,建立MPC83荷瘤小鼠模型,并将DC接种于荷瘤小鼠皮下,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠生存期的影响。 结果:纯化蛋白经鉴定为分子量70KD的HSP70-PCs;平均1克湿重肿瘤组织中获得79.95μg的HSP70-PCs;HSP70-PCs在10-12μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞最强效果,用HSP70-PCs负载的DC能增强T细胞的增殖和活化能力,其诱导的CTL对小鼠胰腺癌MPC83肿瘤细胞具有特异性杀伤作用;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期。 结论:用上述层析法可分离出较高纯度、保留肿瘤抗原信息的HSP70-PCs;体外将其负载经联合细胞因子诱导培养的DC可激活T淋巴细胞,产生对该肿瘤细胞的特异性杀伤效应。体内对胰腺癌荷瘤小鼠具有显著的免疫治疗效果。


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