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TGF-β/Smad信号转导通路对紫外线致人工皮肤光老化中MMP-1、pro-collagenⅠ mRNA表达影响的研究

罗雯  
【摘要】: 目的: 通过体外构建人工皮肤器官型培养基质金属蛋白酶1、Ⅰ型前胶原蛋白、TGF-βⅠ型受体及TGF-βⅡ型受体mRN,建立人工皮肤光老化模型,检测紫外线致人工皮肤光老化中A的表达作用,探讨TGF-β/Smad信号转导通路在皮肤光老化中的作用,为光保护剂的开发提供理论依据及研究靶点。 方法: 1.通过三维器官培养模型制备含有表皮及真皮的人工皮肤替代物; 2.以不同剂量UV(波长280-400nm,0J/cm2-40J/cm2)照射人皮肤成纤维细胞,通过MTT法检测细胞的活性,筛选建立人工皮肤光老化模型的紫外线剂量; 3.通过Real-Time RT-PCR法(荧光染料掺入法)检测紫外线致人工皮肤光老化模型中基质金属蛋白酶1、Ⅰ型前胶原蛋白、TGFβRⅠ及TGFβRⅡmRNA表达量的变化。 结果: 第一部分:于体外成功构建含有表皮、真皮的复合人工皮肤,HE染色真皮层可见排列呈网状的胶原纤维,其间为均匀分布的成纤维细胞,表皮层可见分层排列的角质形成细胞; 第二部分:MTT结果显示与空白组相比,10J/cm2和20J/cm2UV照射人工皮肤时细胞活性未受到明显的抑制,大于等于30J/cm2的照射剂量使细胞活性明显下降,呈剂量依赖性; 第三部分:(1)30 J/cm2紫外线照射人工皮肤后,基质金属蛋白酶1的mRNA表达量明显增加(P0.05);加入TGF-β1后表达量显著下调(P0.01);而UV照射后8小时加入TGF-β1,该基因mRNA的表达量仍较对照组高(P0.05); (2)30 J/cm2紫外线明显抑制Ⅰ型前胶原蛋白mRNA的表达(P0.05);加入TGF-β1后表达量显著增高(P0.01);而UV照射后8小时加入TGF-β1,该基因mRNA的表达量仍较对照组低(P0.05),差异有统计学意义; (3)TGFβRⅠ的mRNA表达在不同处理组间无显著性差异(P0.05); (4)30 J/cm2紫外线照射人工皮肤后,TGFβRⅡmRNA的表达量显著下调(P0.01);加入TGF-β1后表达量显著增加(P0.01);而UV照射后8小时加入TGF-β1,该基因mRNA的表达量仍较对照组低(P0.01),差异有统计学意义。 结论: 1.成功构建含有表皮及真皮的复合人工皮肤; 2.首次应用复合人工皮肤建立光老化模型; 3.证实UV可以抑制人工皮肤中Ⅰ型前胶原mRNA的表达,同时上调MMP-1的表达,促使人工皮肤中真皮胶原减少,而这种调控作用与TGF-βRⅡ的表达受到抑制,TGF-β/Smad信号传导通路被削弱有关; 4.证实TGF-βRⅠ在紫外线致人工皮肤光老化过程中无明显作用。


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