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美洲大蠊精制物CⅡ-3对MFC荷瘤小鼠B淋巴细胞分化发育的影响

陈泽锋  
【摘要】:【目的】肿瘤特别是恶性肿瘤已成为严重影响人类健康的一种疾病,人们一直在寻找一种有效且毒副作用低的治疗方法。多肽类药物以其来源多、分子量小、特异性强、毒副作用小等特点作为新的肿瘤治疗药物一直是科研工作者的研究热点。美洲大蠊精制物CⅡ-3(简称CⅡ-3)是大理大学云南省昆虫生物医药研发实验室研制的主要成分为肽类的一种物质,实验表明其对多种人体肿瘤细胞的生长具有抑制作用,但是其在体内的抗肿瘤机制尚未全部明确。本实验通过建立小鼠胃癌细胞MFC荷瘤小鼠模型,给予美洲大蠊精制物CⅡ-3处理,研究CⅡ-3对荷瘤小鼠B淋巴细胞分化发育的影响,了解其抗肿瘤的免疫调节机制,为该药物的研究开发提供实验基础和数据支持。【方法】取平均体重为20g左右、6~8周龄的SPF级雌性BALB/c小鼠,将处于对数生长期的MFC细胞接种于BALB/c小鼠右侧腋下建立MFC荷瘤小鼠模型。荷瘤小鼠随机分为模型组(20mL/㎏生理盐水灌胃,1次/日)、CTX组(45mg/㎏,腹腔注射10mL/㎏,隔日一次)、CⅡ-3低剂量组(100mg/㎏,20mL/㎏灌胃,1次/日)、CⅡ-3中剂量组(200mg/㎏,20mL/㎏灌胃,1次/日)、CⅡ-3高剂量组(400mg/㎏,20mL/㎏灌胃,1次/日),另外设正常对照组(20mL/㎏生理盐水灌胃,1次/日),每组12只。小鼠建模次日起开始给药,连续进行给药处理10天,结束处理的次日处死小鼠进行分析。无菌获取小鼠骨髓细胞,荧光抗体染色后FACS Calibur检测分析小鼠骨髓B淋巴细胞及各发育阶段即祖B细胞(B220~+CD43~+)、未成熟B细胞(B220~+IgM~+IgD~-)和成熟B细胞(B220~+IgM~(+/-)IgD~+)的分布情况。无菌取小鼠脾脏,制成脾脏单个细胞悬液,取一部分细胞悬液荧光抗体染色后FACS Calibur检测分析小鼠脾脏中Fo B细胞(B220~+CD23~+CD21CD35~(int))和MZ B细胞(B220~+CD23~-CD21CD35~(hi))还有非类别记忆B细胞(B220~+IgD~+CD27~+)与类别记忆B细胞(B220~+IgD~-CD27~+)的分布情况,另取部分单个脾细胞悬液,获取脾脏淋巴细胞,加LPS培养4天,荧光抗体染色后FACS Calibur检测分析B淋巴细胞活化(CD69~+)的情况。无菌取小鼠淋巴结,制成单细胞悬液,荧光抗体染色后FACS Calibur检测分析淋巴结中B细胞分布。无菌获取小鼠腹腔细胞,荧光抗体染色后FACS Calibur检测分析腹腔中B淋巴细胞及其亚群B1细胞(B220~(int)IgD~-)、B1a细胞(B220~(int)IgD~-CD5~+CD11~+)和B1b细胞(B220~(int)IgD~-CD5~-CD11~+)的分布情况。实验数据采用SPSS17.0软件进行统计分析,都以均值±标准差进行表示。各组之间的比较用方差齐性检验和单因素方差分析,当组与组织间进行两两比较时,如果方差齐则采用LSD检验,如果方差不齐时则采用Games-Howell检验。P0.05为差异具有统计学意义。【结果】1.荷瘤小鼠骨髓细胞分析显示,与正常组、模型组和CTX组相比,CⅡ-3低、中、高剂量组均能够使小鼠骨髓中的总B淋巴细胞比例增多(P0.05),CⅡ-3低剂量组对增加骨髓总B淋巴细胞比例的影响强于CⅡ-3中、高剂量组的影响;与正常组、模型组和CTX组比,CⅡ-3低、中、高剂量组均能上调小鼠骨髓B细胞各发育阶段细胞比例即Pro B细胞、Immature B细胞和Mature B细胞的比例(P0.05),且Mature B细胞大于Pro B细胞和Immature B细胞,高剂量组对骨髓B细胞发育的影响强于低和中剂量组的影响。2.荷瘤小鼠脾脏细胞分析显示,与正常组、模型组及CTX组相比,CⅡ-3低、中、高剂量组均能够使小鼠脾脏中的总B淋巴细胞比例升高(P0.05);与正常组和CTX组相比,模型组及CⅡ-3低、中、高剂量组的MZ B细胞的比例均增高(P0.05);与模型组和CTX组相比,CⅡ-3低、中、高各剂量组的Fo B细胞的比例明显增多(P0.05)。与正常组和模型组相比,CⅡ-3低、中、高剂量组的类别转换记忆B细胞与非类别转换记忆B细胞的比例均有所增加(P0.05)。与正常组和模型组相比,CⅡ-3低、中、高剂量各组的活化的B淋巴细胞的比例均升高(P0.05)。从整体分析,低剂量组的CⅡ-3对于小鼠脾脏B淋巴细胞亚群分布的影响强于中剂量组和高剂量组。3.荷瘤小鼠淋巴结细胞分析显示,与正常组、模型组和CTX组相比,CⅡ-3低、中、高剂量组的B细胞的比例升高(P0.05),且CⅡ-3低剂量组对小鼠淋巴结B细胞比例的影响强于CⅡ-3中剂量组和CⅡ-3高剂量组的影响。4.荷瘤小鼠腹腔细胞分析显示,与正常组、模型组及CTX组相比,CⅡ-3低、中、高剂量组均能够使小鼠腹腔中的总B淋巴细胞比例增多,其中低剂量的CⅡ-3作用比中剂量组和高剂量组的作用明显(P0.05);与正常组、模型组相比较,CⅡ-3低、中、高剂量组的B1细胞和B1b细胞的比例明显升高(P0.05),而B1a细胞比例下降(P0.05),低剂量的CⅡ-3作用强于中剂量组和高剂量组。【结论】1.美洲大蠊精制物CⅡ-3能够增加小鼠骨髓中B淋巴细胞的比例。同时也能够促进骨髓中B细胞的分化发育,促使Pro B细胞的生成,促使B淋巴细胞由未成熟B细胞向成熟B细胞发育。2.美洲大蠊精制物CⅡ-3能够影响小鼠脾脏中B淋巴细胞亚群的分布,提高小鼠脾脏中总B细胞、MZ B细胞和Fo B细胞、非类别转换记忆B细胞和类别转换记忆B细胞的比例。且美洲大蠊精制物CⅡ-3能够有效促进小鼠脾脏中B淋巴细胞的活化。3.美洲大蠊精制物CⅡ-3能够上调小鼠淋巴结中的B淋巴细胞的比例。4.美洲大蠊精制物CⅡ-3能够使小鼠腹腔中B淋巴细胞的比例增加;上调B1细胞和B1b细胞,并且下调B1a细胞。


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