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β_2-肾上腺素受体的纯化及其与药物相互作用研究

苏华  
【摘要】:小分子药物与受体蛋白间相互作用研究对药物作用机制、新药开发,药物筛选等领域的发展具有重要意义。β2-肾上腺素受体(β2-AR))属于分布于平滑肌中的跨膜蛋白,是呼吸道病变药物发挥药效的主要靶体。在离体环境中,研究β2-AR的结构及其与药物的相互作用时,需要纯的β2-AR样品,但是β2-AR的纯化技术目前仍未能很好地解决。本文通过对β2-AR分离纯化过程的分析,认为β2-AR能否从组织细胞上脱落进入溶液中是整个纯化过程的关键环节,故围绕β2-AR展开了一系列研究。全文分为三章,作者的主要贡献如下: 一、作者设计并且通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、牛胆酸钠、胆酸钠以及毛地黄皂苷/胆酸钠/CHAPS五种去垢剂对β2-AR纯化效果的影响,筛选出了β2-AR的最佳增溶剂为毛地黄皂苷/胆酸钠/CHAPS(质量比为1:5:2),为分离纯化β2-AR奠定了一定的基础和方法。 二、采用前沿色谱法和竞争洗脱法分别测定受体拮抗剂——普萘洛尔和受体激动剂——克伦特罗两种不同类型的药物与β2-AR之间的结合常数、结合位点数,结果表明:盐酸普萘洛尔与β2-AR的相互作用属于双位点结合,总结合位点数为3.27×10-6M,结合常数分别为2.12×104M-1,0.01×104M-1;盐酸克伦特罗在β2-AR生物色谱柱上是单位点吸附,即它的吸附过程符合单朗格缪尔吸附模型,总结合位点数为1.07×10-6M,结合常数为0.53×104M-1;前者在β2-AR生物色谱柱上的能量是非均相分布的,后者正好相反。


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