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基于磁性微粒的法医样本DNA纯化

李芳  
【摘要】:近年来,法医DNA数据库构建的工作量愈来愈大,对血斑样品大规模自动化提取的需求亦愈来愈大。此外,一些重大案件法医DNA检验过程常会碰到各种疑难生物检材,这些检材多为少量甚至痕量、还会受到周围环境的影响而导致DNA分子受损或DNA链断裂。但这些检材往往又是侦查破案的唯一线索,对疑难生物检材DNA的提取环节变得尤为关键,也成为制约法医DNA分析的“瓶颈”。因此,选择高性能的DNA纯化方法成为法医DNA建库和案件分析的首要条件。目前,用于法医样本DNA纯化的方法主要有酚-氯仿抽提法、Chelex-100法和磁性分离法。相比酚-氯仿抽提法和Chelex-100去,磁性分离法不仅克服了传统方法需要离心、操作繁琐、污染环境等缺点,同时还可以配套自动化仪器,满足样品纯化高通量的需求。 本课题以二氧化硅磁性微粒为载体,以血斑为实验样本,通过对纯化过程中的裂解、结合、清洗、洗脱四个环节的优化,确立了血斑样本DNA纯化的方法,并对纯化所得的DNA进行荧光定量检测,对批间差、批内差以及方法的稳定性做了系统评价;与同类产品进行比较,以PCR-STR分型检测对方法的性能进行了的评价。结果表明:用该方法可以从直径为5 mm2的血斑样本中得到50-70 ngDNA;方法具有较好的稳定性,平均批内差为9.23%,批间差为12.36%;与国内外产品进行比较并进行STR复合荧光扩增,表明该方法不仅满足STR分型检测的需要,而且还可跟市售的同类产品相媲美,用本课题建立的方法得到的DNA不含PCR扩增抑制剂。 将优化的体系用于唾液、指甲、烟蒂、头发、拭子等多种微量样本的DNA纯化,并以下游PCR-STR分型检测进行验证。结果显示,用该方法得到的DNA用于PCR-STR分型,16个STR基因座均得到了正确分型结果。说明方法同样适用于多种法医生物检材,并且能够得到较好的分型结果。


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