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枸杞糖蛋白LbGp5-B的分离纯化及其N-糖链的结构解析

孙伟  
【摘要】:糖蛋白LbGp5-B是从枸杞多糖(LBP)中分离纯化出的一种糖复合物,具有体外抗氧化活性,含量约占生药枸杞的0.019%,然而,目前对其糖链结构的解析至今未见报道。本文从生药枸杞中提取了LBP,对LBP进行了多次的分离纯化得到了单一的糖蛋白LbGp5-B,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测了蛋白质的纯度与分子量,采用苯酚-硫酸法(Phenol-sulfuric acid)、考马斯亮蓝法(Bradford)和气相色谱(GC)法测定了基本理化性质。利用肽N-糖苷酶A(PNGase A)和肽N-糖苷酶F(PNGase F)释放了糖蛋白上的N-糖链,用电喷雾电离质谱(ESI-MS)及多级质谱(MSn)分析了N-糖链的结构。结论如下:1.经SDS-PAGE鉴定表明:糖蛋白LbGp5-B蛋白均一,分子量约为21 KDa2.经Phenol-sulfuric acid法和Bradford法检测表明:糖蛋白LbGp5-B中糖含量为9.6%,蛋白含量为56.13%。其余32.47%经查阅相关文献分析得知主要为色素。3.经ESI-MS、二级质谱(MS/MS)和MSn分析表明:糖蛋白LbGp5-B中共有18种N-糖组成,有19条N-糖链,其中1条核心五糖结构(5.26%),2条非核心五糖结构(10.53%),3条杂合型(15.79%),6条高甘露型(31.58%),7条复杂型(36.84%),而在复杂型N-糖链中,其中1条为单天线结构(14.92%),3条为双天线结构(42.86%),1条为三天线结构(14.92%),其中糖组成为H3N4的N-糖链具有2个同分异构体。蛋白中所有的N-糖链均为中性糖,其中有2条岩藻糖基化的N-糖链,未发现唾液酸化的糖链。本文对枸杞糖蛋白LbGp5-B N-糖链的鉴定和分析能为研究蛋白质功能与糖基化之间的关系提供一定的基础和依据。


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