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白蚁球菌的复壮保藏和活性物质测定

赵剑  
【摘要】:药食用真菌以其独特的天然活性和药用价值越来越被科研工作者所重视,尤其昆虫寄生真菌如冬虫夏草、蛹虫草等已被研究证明具有极高的药用价值。白蚁球菌Fibularhizoctonia sp.是在圆唇散白蚁巢穴中发现的共生真菌,前期研究发现其菌丝体生长繁殖能力强、产量高,富含三萜类化合物和真菌多糖等生物活性物质,在真菌资源可利用方面,具有非常好的开发前景。本论文主要针对白蚁球菌的退化与复壮、菌丝体安全性和活性物质,开展白蚁球菌在扩大培养中质量检测指标和潜在药食用价值方面的研究,以期为白蚁球菌未来的开发提供依据。主要研究结果如下:(1)菌株复壮。为保持菌种的优良性状,通过对不同传代次数菌株质量的显微检测,制定了其优良性状的观察指标和保藏方法,菌丝结构粗壮强健、菌丝洁白、分枝繁茂具有良好扩散活性即可作为传代和保藏的母株,而且要严格控制传代次数在3代以内,当发生退化老化现象时应及时进行质量检测筛选,可通过改良的尖端分离复壮技术筛选保持原有繁殖能力的菌株。(2)菌丝体安全性。急性毒性试验表明,雌雄大鼠未有死亡,试验动物解剖显示各器官未出现明显的病理性变化雌雄大鼠经口最大耐受剂量(MTD)灌胃,显示该菌丝粉属于无毒级。(3)氨基酸分析。菌丝体氨基酸总含量达16.35%,包含人体必需的7种必需氨基酸:亮氨酸Leu、赖氨酸Lys、蛋氨酸Met、苏氨酸Thr、苯基丙氨酸Phe、缬氨酸Val、异亮氨酸Ile,必须氨基酸占总氨基酸含量的30.15%。(4)其他活性物质。作为真菌类的特征醇类物质麦角甾醇,菌丝体中含量为3070μg/g,相比灵芝孢子粉和冬虫夏草含量更高,高含量的麦角甾醇促进了菌丝体细胞膜的完整性和膜结合酶的活性,液体条件下具有更强的生长繁殖活力;虫草酸含量为33.27mg/g,比野生型冬虫夏草含量略低,但培养条件简单、繁殖较快、得率高,可以通过扩大培养达到提高虫草酸产量目的。(5)真菌多糖。通过改良的超声-水提醇沉法测定,菌丝粉粗多糖提取得率为25.05%,提取率为85.60%,菌丝粉中真菌多糖实际含量测定达21.40%,比常见药用真菌所含多糖量更高,在多糖的体外抗氧化性实验中显示其抗氧化能力随着多糖浓度升高而升高,表现出良好的抗氧化活性,真菌多糖作为重要的真菌类活性物质之一,开发成为高质量多糖产品具有很高的价值。综上,白蚁球菌具有良好的生长繁殖潜力,可应用于深层发酵,菌丝体外部形态特征和麦角甾醇含量动态变化可以作为菌种防退化质量检测指标,真菌多糖等活性物质具有良好的药用开发潜力,应开展更深入的研究。


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