收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

弱阳离子交换色谱固定相对还原变性溶菌酶的折叠贡献

刘红妮  
【摘要】:通过对8种不同种类弱阳离子交换色谱(WCX)填料对还原变性溶菌酶(Lys)复性的考察,选出了配基为3-硝基邻苯二甲酸酐柱为最佳复性的色谱柱,在此基础上,对WCX固定相对还原变性Lys折叠的贡献及其影响复性的各个条件进行研究。 全文包括四个部分: 1.文献综述:蛋白折叠的研究具有重大的理论意义和使用价值,液相色谱法(LC)是近年来发展最快的方法之一。本文仅对LC固定相对蛋白折叠的贡献以及二硫键折叠的研究进展进行了全面地综述。 2.为了减少不可逆吸附,在硅胶表面先键合了一层聚乙二醇(PEG),以使硅胶表面变成亲水性,然后再对其表面进行化学改性使其成为弱阳离子交换(WCX)介质。亲水性的增强能够减少和避免生物大分子的不可逆吸附,并且可以维持其足够高的生物活性回收率。为了比较PEG对蛋白质复性的影响,本文用键合了不同分子量PEG的PEG200、PEG400、PEG600、PEG1000四种柱子,分别比较了它们对还原变性Lys复性的影响。结果表明从对还原变性Lys复性以及柱子稳定性方面考虑,键合PEG400的柱子效果最好。 3.由于在WCX中,在弱的离子交换剂上配体结构或组成的稍微变化就会对蛋白折叠产生较大的影响。研究了四种不同配基(3-硝基邻苯二甲酸酐、丁二酸酐、邻苯二甲酸酐、苯基丁二酸酐)的弱阳离子交换色谱填料对还原变性的Lys复性效率的影响。结果表明配基为3-硝基邻苯二甲酸酐的WCX柱复性效果最好。指出一个新概念,活性回收率(RB)与质量回收率(RM)之比R_((B/M)),通过实验检验,R_((B/M))可以很好的反映复性条件的好坏。 4.用WCX对还原变性Lys的复性进行了研究。考察了流动相中脲浓度及盐种类对用WCX对Lys复性的影响,结果表明当流动相中含有 3.Omol.L一’的脉及l.Omol·L一’硫酸钱时能提高其生物活性回收率。在此 wCX柱上,Lys的保留呈现离子交换和疏水双保留机理。发现在硅胶 基质的wex柱上,当蛋白浓度为1 5.omg·mL一’到so.omg·mL一’时,用 WCX折叠的复性产率均高于用稀释法的复性产率;在蛋白浓度为 20.omg’mL一’时活性回收率达到最高,为95.4%。同时还考察了流动相 组成、脉浓度、pH值、流速、温度和复性时间等对复性的影响。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 姜晓琳;陆杰;顾瑾;;溶菌酶在聚电解质溶液中溶解度的测定及关联[J];应用化工;2011年07期
2 陈萍;赵玮;李琳;胡松青;;水溶性葡聚糖亲和-超滤载体对溶菌酶吸附分离特性的研究[J];食品工业科技;2011年08期
3 杨辉;闫守泉;赖祯冬;林祖端;梁海秋;朱萍;;产溶菌酶白色链霉菌的筛选及鉴定[J];现代食品科技;2011年08期
4 李向荣;;盐酸胍和尿素诱导溶菌酶变性的微量热研究[J];化学通报;2011年09期
5 王珺;吴晓;霍乃蕊;;牛初乳中免疫因子研究进展——以长江中下游油菜和水稻种子生产商为例[J];天津农业科学;2011年03期
6 徐为;姚爱华;艾凡荣;王德平;黄文旵;;多孔羟基磷灰石微球的药物缓释性能[J];材料研究学报;2011年04期
7 徐义邦;孙向英;杨传孝;;碲化镉量子点自组装膜的构建及其对溶菌酶的界面传感[J];分析化学;2011年09期
8 陈伟;贾原媛;郑伟;李小明;周俊;杨麒;罗琨;;胞外多聚物对酶催化污泥厌氧水解的影响研究[J];环境科学;2011年08期
9 万印华;陈向荣;马光辉;苏志国;崔占峰;;超滤分离蛋白质过程快速优化新技术及其应用[J];膜科学与技术;2011年03期
10 范雪荣;王强;王平;袁久刚;;可用于纺织工业清洁生产的新型酶制剂(续一)[J];针织工业;2011年06期
11 和丽丽;闫书一;梁渠;冯启明;王维清;刘爱平;;聚氨酯功能泡塑的制备及其分离蛋白性能的研究[J];功能材料;2011年S3期
12 ;NEWS[J];分析化学;2011年08期
13 ;鲜牛奶、巴氏杀菌牛奶、灭菌牛奶有什么不同[J];大众标准化;2002年12期
14 胡冬梅;孙涛;谢晶;;南美白对虾保鲜剂研究进展[J];食品科学;2011年13期
15 袁丹丹;张伟国;;L-缬氨酸产生菌的原生质体融合及抗高糖融合株的筛选[J];食品与生物技术学报;2011年04期
16 刘会平;卫永华;宗学醒;马丽;;复合天然防腐保鲜液对Mozzarella干酪贮藏期的影响[J];食品工业科技;2011年07期
17 徐歆;黄琴;阎永贞;周绪霞;陈有亮;李卫芬;;西式火腿肠复配防腐剂的研制[J];食品科学;2011年14期
18 张琇;王永娟;马爱瑛;张丽琴;;灵武长枣果酒酿酒酵母与红酵母原生质体融合的研究[J];西北农业学报;2011年06期
19 闫亮珍;李晓然;全哲学;马恩波;;汾酒大曲和酒醅样品DNA提取方法的优化[J];食品与发酵工业;2011年03期
20 吴伟;;食品酶学教学改革与实践[J];中国科教创新导刊;2011年19期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨芳;项瑾;杜芬;梁毅;;pH诱导溶菌酶及其同源蛋白去折叠研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
2 郭锡久;阮兴朝;苏德永;赵碧华;江世芬;;复发性口疮与血清微量元素及溶菌酶含量关系探讨的实验研究[A];FDI、CSA临床口腔进展学术会议论文汇编[C];1999年
3 渠琛玲;张寒琦;白雨萍;孙颖;王璐;;电喷雾质谱法研究人参皂苷Rd与生物分子的相互作用[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
4 谢韵;周健;;溶菌酶在带电表面的吸附取向的计算机模拟[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
5 乐知;袁琳;陈红;;C6磺化壳聚糖的溶菌酶高特异性结合[A];2009年全国高分子学术论文报告会论文摘要集(下册)[C];2009年
6 封宾;滕枫;唐爱伟;王琰;候延冰;王永生;;以CdSe纳米晶标记溶菌酶后有关能量传递的研究及应用[A];第11届全国发光学学术会议论文摘要集[C];2007年
7 陈慷;王印其;田小丽;;正常眼和眼表疾病泪液溶菌酶测定[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
8 武云丽;何锡文;李文友;;CdTe纳米粒子与溶菌酶相互作用的研究[A];中国化学会第26届学术年会分析化学分会场论文集[C];2008年
9 史萸芳;;溶菌酶抑菌作用的实验研究[A];全国第四次牙体牙髓病学术会议论文汇编[C];1995年
10 谷振宇;苏志国;周海梦;;溶菌酶在凝胶过滤复性中的行为特点[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王彦;液-固界面的吸附及溶菌酶在液相色谱中复性的应用研究[D];西北大学;2002年
2 王君;表面活性剂辅助蛋白质复性过程机理研究[D];清华大学;2004年
3 董晓燕;辅助因子促进蛋白质复性的研究[D];天津大学;2005年
4 张琇;海洋芽孢杆菌S-12-86溶菌酶的发酵、纯化与生物活性的研究[D];中国海洋大学;2007年
5 费砚群;突环嫁接产生“双功能”酶和“双中心”酶[D];吉林大学;2008年
6 汪家琦;鸡蛋中主要生物活性物质的制备及应用性质的研究[D];东北农业大学;2000年
7 李宾;工程人溶菌酶骨架中突环为酶的活性部位[D];吉林大学;2007年
8 刘杨;新型亲和反胶团系统及其蛋白质萃取特性研究[D];天津大学;2006年
9 岳巧丽;三种蛋白质与小分子物质相互作用的分子光谱法研究[D];西北大学;2008年
10 朱忠珂;固态发酵植酸酶、溶菌酶对肉仔鸡及仔猪的应用研究[D];西北农林科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘红妮;弱阳离子交换色谱固定相对还原变性溶菌酶的折叠贡献[D];西北大学;2004年
2 郝杰;蜡状芽孢杆菌S-12-86产海洋溶菌酶的研究[D];中国海洋大学;2004年
3 姜馗;蛋清溶菌酶提取技术的研究[D];中国农业大学;2005年
4 权宇彤;溶菌酶的制备与活性检测[D];吉林大学;2006年
5 卜兴江;中国对虾组织蛋白酶L和溶菌酶的重组表达及性质研究[D];山东大学;2006年
6 周翔;重组大鼠溶菌酶N端多肽的原核表达及其与AGEs的结合作用[D];暨南大学;2006年
7 郁章琦;染料木素含磷衍生物的合成及性质研究[D];郑州大学;2007年
8 郭醉元;溶菌酶与中药治疗奶牛子宫内膜炎的比较研究[D];东北农业大学;2008年
9 贾长虹;人工伴侣与小分子添加剂协同辅助变性溶菌酶复性的研究[D];天津大学;2007年
10 刘慧;溶菌酶滴眼液的研制及对兔细菌性角膜炎模型的作用研究[D];山东大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;解读“溶菌酶”[N];江苏科技报;2001年
2 姚云昕;新型保健添加剂——溶菌酶[N];中国食品报;2009年
3 丁亮;怎样从蛋清中提取溶菌酶[N];山西科技报;2002年
4 上海蓝岛加华食品有限公司 严进;溶菌酶应用探讨[N];中国食品质量报;2004年
5 陈国东;努力寻找攻克非典的新型武器[N];医药经济报;2003年
6 广东省家禽科学研究所 邹仕庚 安徽省含山畜牧兽医站 朱光道;溶菌酶及其在畜禽饲料中的应用[N];中国畜牧兽医报;2009年
7 特约记者 陈传武;湖北建设生物溶菌酶生产基地[N];中国化工报;2009年
8 ;奶牛乳房炎的危害及其综合防制(未完待续)[N];中国畜牧水产报;2001年
9 重庆迎龙化工有限公司供稿;几种重要的天然食品防腐剂的性状[N];中国食品质量报;2003年
10 朱文英;小伤口流血不必急堵[N];解放日报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978