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新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用

高勇  
【摘要】:荧光探针在分子生物学、微生物学、生物化学、分析化学、化工和医药工业等领域有着广泛地应用。同时它的发展与生命科学、化学、生物技术、诊断医学等学科紧密相关。随着相关技术的发展与普及,荧光探针的应用越来越广泛,与此同时对荧光探针染料性能的要求也越来越高。荧光探针染料的合成与应用研究已发展成为生命科学和化学两大学科的交叉性前沿研究领域。由于单克隆抗体荧光探针染料在免疫荧光组织化学中的重要作用,单克隆抗体荧光探针染料的合成及应用研究,成为了该前沿研究领域的一个研究热点。 罗丹明类荧光探针染料,具有荧光量子产率高,激发波长长,适用的pH值范围宽(可低于生物体的pH值)等优点。另外还可以通过对母体的修饰满足不同使用条件(例如:最大吸收波长,最大发射波长,量子产率等)的需要。所以该类荧光探针染料已广泛的应用于生物活体内的pH值、离子、小分子的检测和复杂生物体系的研究等领域。 为了提高单克隆抗体荧光探针染料在生物亲和性、水溶性和荧光强度等方面的性能,本论文围绕新型罗丹明基单克隆抗体荧光探针染料的设计、合成及免疫荧光组织化学应用展开,主要内容有以下几个方面。 1.对5(6)-羧基罗丹明110的合成条件进行了优化。提出了一种未见文献报道的5、6-羧基罗丹明的分离方法,成功的对5(6)-羧基罗丹明110异构体混合物和5(6)-羧基-2',7'-二甲基罗丹明6G异构体混合物进行了分离,并对这两组共四种化合物进行了表征。 2.首次报道了5、6-羧基罗丹明荧光光谱的差异,并发现5-羧基罗丹明的λ_(cm,max)总是大于6-羧基罗丹明的λ_(cm,max')这个发现为研究分子结构与荧光的关系提供了新的实验依据。 3.设计了两类未见文献报道的具有连接链的新型罗丹明基单克隆抗体荧光探针染料。对相关的三种连接链化合物进行了合成,并提出了一种未见文献报道的聚乙二醇连接链化合物的合成方法。 4.合成了两个具有亲水性空间连接链的新型罗丹明基单克隆抗体荧光探


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