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红车轴中基质金属蛋白酶抑制剂及抗氧化活性研究

王书英  
【摘要】: 基质金属蛋白酶(MMPs)是一类依赖于锌离子、有降解细胞外基质(ECM)能力的内肽酶家族。MMPs抑制剂在治疗癌症中有广阔的前景,从天然植物提取物中筛选抗MMPs的化合物,并开发抗肿瘤新药已成为该领域的研究热点。本研究以MMPs为分子靶点,通过硅胶柱层析、高效液相色谱等分离手段,应用酶学方法,对红车轴草中抑制MMP-16活性的有效成分进行追踪,并对提取物的抗氧化活性进行研究。论文主要包括以下内容: 1.文献综述 对红车轴草、基质金属蛋白酶抑制剂以及抗氧化活性的国内外研究现状进行概述。 2.筛选MMP-16的有效抑制植物 考察红车轴草、毛冬青等7种植物提取物对MMPs的抑制能力。结果表明,48μg/mL的40%红车轴提取物对MMP-16有良好的抑制作用,抑制率为42%,说明红车轴中含有抑制MMP-16的成分。 3.考察红车轴提取物中四种主要异黄酮对MMP-16的抑制作用 红车轴中四种主要异黄酮抑制MMP-16活性的效果为:提取获得的92.28%鹰嘴豆芽素A IC_(50)为29.56μg/mL,有较好的抑制活性;但人工合成的97%的鹰嘴豆芽素AIC_(50)117.74μg/mL,抑制活性较小;提取获得的96.63%刺芒柄花素与人工合成的刺芒柄花素标品对MMP-16均无稳定的抑制作用:染料木素标品抑制活性较小,20μg/mL浓度下抑制率为3.52%;而大豆甙元几乎无抑制。 4.追踪分离红车轴提取物中MMP-16抑制成分 40%红车轴提取物经硅胶柱层析分离制得33个馏分,其中13号馏分对MMP-16抑制作用较强且有一定计量关系。用高效液相色谱半制备柱对13号馏分进一步分离,得到五个单峰物质,经质谱分析,根据分子量大小并结合文献资料,初步推测1、2、3和5号可能分别为刺芒柄花素、德克萨生、德鸢尾素、和鹰嘴豆芽素A,4号量少未进行进一步分析。其中本研究发现德鸢尾素是天然产物提取得到的较强的MMP-16抑制剂,IC_(50)仅为25.17μmol/L。 5.红车轴提取物抗氧化活性研究 对40%红车轴提取物、13号浸膏、分离得到的德鸢尾素的抗氧化活性进行了考察,结果表明三者均有清除自由基能力,DC_(50)分别为68.71μg/L、9.09μg/L和0.023μmol/L。实验还测得维生素C在0.023μmol/L浓度时,对自由基的清除率仅为2.08%,说明德鸢尾素清除自由基能力明显优于维生素C,是很好的抗氧化剂。


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