收藏本站
收藏 | 论文排版

牛β-防御素BNBD11在大肠杆菌中的表达及抑菌活性测定

赵建乐  
【摘要】:牛中性粒细胞β-防御素(bovine neutrophilβ-defensins,BNBDs),共13种,即BNBD1-13,其中天然的BNBD11具有抗大肠杆菌和金黄色葡萄球菌活性。本研究通过基因工程方法,在大肠杆菌中高效表达了经过密码子修饰的抗菌肽基因BNBD11,并对表达产物进行分离、纯化以及抑菌活性测定。具体包括以下三部分: 1. BNBD11基因的优化合成及表达载体的构建。根据天然抗菌肽BNBD11的氨基酸序列,参照大肠杆菌的偏爱密码子,设计BNBD11的基因,并添加甲酸切割位点,采用人工合成的方法得到优化的抗菌肽基因。然后将目的片段用KpnⅠ和HindⅢ这2个酶切位点定向连接在原核表达载体pET32a上,转化到E. coli DH5α,PCR结果表明在135 bp处出现预期条带,测序结果与设计序列完全一致,证明表达载体pET32a-BNBD11构建成功。 2.融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化。重组表达载体pET32a-BNBD11在E. coli BL21(DE3)中成功表达出21 ku的融合蛋白Trx-BNBD11。经过表达条件优化,融合蛋白主要以可溶性形式高效表达。采用Ni Sepharose柱亲和层析法纯化融合蛋白。融合蛋白透析除盐后用50%甲酸进行切割,50℃反应24 h可使融合蛋白基本被切割。 3. BNBD11的纯化及抑菌活性测定。Trx-BNBD11经甲酸切割后的混合物再用RP-HPLC纯化,微量稀释法筛选有抑菌活性的组分,Tricine-SDS-PAGE鉴定结果表明获得了高纯度的重组BNBD11。采用微量稀释法对纯化后的样品进行了最小抑菌浓度(MIC)测定,结果表明重组BNBD11对大肠杆菌ATCC25922有较强抑菌效果,其MIC为20μg/mL,但对金黄色葡萄球菌ATCC2592的抑菌效果不明显。 本研究构建了遗传密码优化的BNBD11基因表达的工程菌,并获得高纯度的重组BNBD11,并对重组BNBD11进行了抑菌活性测定,为进一步研究BNBD11奠定了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张辉华,曹永长,毕英佐;鸡β-防御素cDNA的克隆与序列分析[J];中国预防兽医学报;2004年03期
2 吴金梅,王艳玲,陈丽颖;禽类抗菌肽的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2005年05期
3 鲍星;蔡俊鹏;;蛭弧菌消除鲜切香芹大肠杆菌试验[J];广东农业科学;2011年19期
4 罗见龙;;遗传工程学[J];甘肃农业科技;1978年01期
5 王尔中;质粒DNA对大肠杆菌转化条件的探讨[J];动物学报;1980年01期
6 雷凡东;;用番石榴叶治疗仔猪下痢[J];上海畜牧兽医通讯;1985年03期
7 ;基因工程[J];生物技术通报;1986年09期
8 ;基因工程[J];生物技术通报;1987年06期
9 杨正时;黄念君;;侵袭性大肠杆菌实验性豚鼠角膜感染与免疫[J];微生物学报;1987年03期
10 ;农业其它[J];生物技术通报;1989年01期
11 ;基因工程[J];生物技术通报;1989年04期
12 ;基因工程[J];生物技术通报;1989年08期
13 ;激素和活性多肽[J];生物技术通报;1989年12期
14 ;医药其他[J];生物技术通报;1990年08期
15 ;化工上的应用[J];生物技术通报;1990年12期
16 ;基因工程[J];生物技术通报;1991年04期
17 孙昌荣,贾舒君,侯贵盛,黄书民,赵国力,苟仕金;大肠杆菌抗体在重组α干扰素纯化中的应用[J];中国兽医学报;1992年02期
18 白润江;任娅;马端端;;十种中药的抑菌作用[J];兰州大学学报(医学版);1992年03期
19 李自力;;烟酸氟哌酸的体外抗菌活性测定[J];广西畜牧兽医;1992年02期
20 陈永林,王栋,吴纪经,云昌佑,尚玉华;山羊沙雷氏菌与大肠杆菌混合感染症[J];中国兽医杂志;1993年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 石建州;康相涛;陈其新;孙桂荣;田亚东;黄艳群;李国喜;;非洲鸵鸟防御素Defensin在大肠杆菌中的表达[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
2 周财源;蔺丽娟;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;马得莹;;一个新的禽β-防御素,鹅β-防御素5基因克隆与生物学特性的初步分析[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
3 蔺丽娟;王瑞琴;周财源;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;马得莹;;鹌鹑β-防御素10基因的克隆及其生物学作用的初步研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
4 李子瑞;邵昱昊;韩宗玺;刘晓丽;刘胜旺;马得莹;;鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
5 孟丽丽;钟凯;王月影;杨国宇;王林枫;韩立强;;断乳对小鼠乳腺β-防御素1基因表达的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
6 陈金永;余冰;黄志清;陈代文;;维生素A调节猪体内β-防御素基因表达的研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
7 赵鹏伟;曹贵方;梁建荣;;绵羊β-防御素cDNA的克隆及其真核表达载体构建[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
8 孟丽丽;钟凯;王月影;杨国宇;王林枫;韩立强;;妊娠和泌乳期小鼠乳腺β-防御素1基因的差异表达[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
9 王瑞琴;蔺丽娟;周财源;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;马得莹;;鹌鹑β-防御素9重组蛋白的原核表达及其生物学特性的初步研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
10 欧阳萍;雷连成;吕爽;韩文瑜;;人溶菌酶基因在大肠杆菌中的融合表达及其生物学活性的研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵鹏伟;蒙古绵羊β-防御素-1的表达、纯化及生物学功能研究[D];内蒙古农业大学;2011年
2 胡琼洁;β-防御素-2,AHL内酯酶对肺部铜绿假单胞菌感染的干预研究[D];华中科技大学;2010年
3 姜中其;仔猪断奶腹泻性大肠杆菌的多重耐药性、毒力因子分布及特异性蛋黄抗体药效的研究[D];浙江大学;2009年
4 王倩;聚羟基脂肪酸酯在大肠杆菌中的合成、降解以及分子改造[D];山东大学;2009年
5 杨银凤;骆驼β-防御素-1(caBD-1)的分子克隆和组织表达[D];西北农林科技大学;2004年
6 刁华;大鼠附睾beta-defensins的表达方法和抗菌活性研究及猴附睾特异表达基因RNase 9的表达和功能探索[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
7 郑宗宝;一体化生物加工过程进行大肠杆菌的半纤维素琥珀酸生产[D];天津大学;2012年
8 康振;大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D];山东大学;2011年
9 孙凤军;大肠杆菌生物膜的形成及其耐药质粒传递和调控的研究[D];第三军医大学;2009年
10 李晓敏;大肠杆菌氧胁迫适应性蛋白质组学、O-抗原研究和嗜热菌NG80-2醛脱氢酶分子生物学研究[D];南开大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵建乐;牛β-防御素BNBD11在大肠杆菌中的表达及抑菌活性测定[D];西北农林科技大学;2011年
2 张名岳;三个新的鹅β-防御素的分离、鉴定及其抗菌机制的初探[D];东北农业大学;2012年
3 马鹏;人源β-防御素-6的原核表达及纯化[D];南京农业大学;2010年
4 郑龙鹏;小鼠β-防御素-9的原核表达及其多克隆抗体的制备[D];南京农业大学;2009年
5 张佩华;婴儿体外循环围术期β-防御素2水平变化的研究[D];浙江大学;2010年
6 李爱娟;大鼠β-防御素-2的重组表达及抗菌活性检测[D];兰州大学;2010年
7 孟丽丽;β-防御素1基因在小鼠乳腺组织中表达的研究[D];河南农业大学;2011年
8 史玉婷;草鱼肠道β-防御素克隆表达及抗菌活性分析[D];湖南农业大学;2012年
9 于宾宾;表达猪β-防御素-2成熟肽重组酵母工程菌的构建[D];华中农业大学;2010年
10 苏丽娜;驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因的原核表达及蛋白活性的鉴定[D];内蒙古农业大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者  陈超;大肠杆菌有望制成生物微型马达[N];科技日报;2006年
2 裴那;Oxoid公司推出快速确认食品中大肠杆菌的方法[N];中国医药报;2009年
3 沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;2011年
4 ;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;2001年
5 陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;2006年
6 编译 王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;2005年
7 记者 冯卫东;除菌香皂其实并不除菌[N];科技日报;2007年
8 冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;2006年
9 宁夏隆德县畜牧兽医站 罗志轶;中西医治疗獭兔球虫和大肠杆菌混合感染[N];江苏农业科技报;2007年
10 赵承渊 北京大学第一医院;“怪病”频出:医学昌明的代价?[N];大众科技报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978