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无机磷细菌的筛选及其Biolog和分子生物学鉴定

刘江  
【摘要】:磷素是植物生长发育所必需的三大营养元素之一。土壤中大多数的磷上为无效态磷,植物无法吸收利用。施入土壤的磷肥极易与土壤中的金属离子Fe~(3+)、Ca~(2+)和Al~(3+)等结合,形成难溶性的磷酸盐沉淀,使有效性下降。但难溶性的磷可以在无机解磷微生物的作用下转变为可被植物利用的可溶性磷。因此筛选分离高效的解磷细菌,不仅可以提高土壤中植物可利用的可溶性磷含量,提高作物产量,还可以减少磷肥的过量使用,避免由此引起的诸多环境问题。 本研究以采自秦岭山周至县的植物根际土壤为研究对象,筛选解磷细菌,研究其解磷能力,并且通过Biolog和16S rDNA系统发育方法对得到的菌株进行分类。本研究主要得到三株高效无机解磷菌株: (1)No.9解磷细菌的菌落直径为10 mm,解磷圈直径为43 mm,D/d值为3.94;在以Ca3 (PO4) 2作唯一磷源的无机磷液体培养基中,28℃培养5 d后,培养液中可溶性磷含量为98.12 mg/L,微生物量磷含量为62.85 mg/L,在无机磷液体培养基中的总解磷量为160.97 mg/L,培养液的pH值为6.11。经过生理生化试验,No.9解磷细菌的革兰染色结果表明其属于革兰氏阴性菌,非肠道菌。通过16S rDNA测序与Genebank数据库中数据比对,No.9菌株属于Inquilinus ginsengisoli,为(Inquilinus)属 (2)No.15解磷细菌的菌落直径为9 mm,解磷圈直径为35 mm,D/d值为3.78;在以Ca3 (PO4) 2作唯一磷源的无机磷液体培养基中,28℃培养5 d后,培养液中可溶性磷含量为80.37 mg/L,微生物量磷含量为53.61 mg/L,在无机磷液体培养基中的总解磷量为133.98 mg/L,培养液的pH值为5.82。经过生理生化试验,No.15解磷细菌的革兰染色结果表明其属于革兰氏阴性菌,非肠道菌。通过16S rDNA测序与Genebank数据库中数据比对,No.15菌株属于醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) ,为不动杆菌属(Acinetobacter)。 (3) No.17解磷细菌的菌落直径为7 mm,解磷圈直径为31 mm,D/d值为4.41;在以Ca3 (PO4) 2作唯一磷源的无机磷液体培养基中,28℃培养5 d后,培养液中可溶性磷含量为104.91 mg/L,微生物量磷含量为36.59 mg/L,在无机磷液体培养基中的总解磷量为141.5 mg/L,培养液的pH值为5.67。经过生理生化试验,No.17解磷细菌的革兰染色结果表明其属于革兰氏阴性菌,非肠道菌。通过16S rDNA测序与Genebank数据库中数据比对,No.17菌株属于荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens) ,为不假单胞菌属(Pseudomonas)。


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