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夏堇转Chitinase和玉米Lc转录因子基因研究

田强强  
【摘要】:本文对夏堇(Torenia fournieri Lind.)转HearNPV Chitinase基因和玉米Lc转录因子进行了研究,主要以夏堇为模式植物探讨外源基因的表达情况,旨在通过转基因手段提高植物体内的几丁质酶含量和黄酮类物质含量,从而增加植物抗病性,并为其他植物的转基因研究奠定基础。主要研究结果如下: 通过PCR的方法扩增出HearNPV ChiA基因(删除了信号肽序列和内质网定位序列)、玉米Lc转录因子,将其克隆进植物表达载体pBI121中,构建了重组植物表达载体ChiA- pBI121,中间载体Lc-pBI121和双价重组植物表达载体Lc-ChiA-pBI121。同时,将其转化根癌农杆菌LBA4404,成功构建了转基因工程菌ChiA-pBI121-LBA4404和Lc-ChiA-pBI121-LBA4404。 通过根癌农杆菌介导的方法对夏堇叶片外植体进行遗传转化研究,获得了8个转ChiA基因株系,分别命名为C1、C2、C3、G2、G3、A1、A2、A3。半定量RT-PCR分析表明8个转基因株系ChiA基因mRNA相对表达量明显高于对照组(P0.05),株系之间的相对表达量也不相同,其中C3株系最高,A2株系最低。证明HearNPV ChiA基因在夏堇体内能够正常表达。几丁质酶活性分析表明,株系C1、C2、A1和A2的几丁质酶活性明显高于对照组,其中株系A1的几丁质酶活性最高。8个转ChiA基因株系中,7个株系转基因苗均出现花期提前的现象,具体现成机制不明。 此外,经过长期筛选还获得了3株转Lc和ChiA双价基因的抗性芽,虽然相关表达水平、色素含量等检测尚未进行,但获得的转双价基因材料为筛选高效的联合抗病新植株奠定了良好的基础。


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