棉铃虫嗅觉相关蛋白的鉴定及功能研究
【摘要】：为了研究棉铃虫嗅觉相关基因的功能,以棉花上的重要害虫棉铃虫为研究对象,采用SMART技术构建了雌雄棉铃虫触角全长的cDNA文库,通过NCBI上的BLAST工具比对筛选,获得15个OBP基因(其中12个为新基因)、7个CSP基因(6个为新基因)和12个受体基因(1个为新基因),通过进一步研究,获得如下主要结论:
1.将获得的OBP基因通过进化树归类,将获得的OBP基因归类,包括9个OBP基因,1个ABP基因,3个PBP基因,1个GOBP1基因和1个GOBP2。利用荧光技术研究了14个典型OBP基因和2个CSP基因在雌雄棉铃虫成虫各部分和各龄期幼虫中的相对表达量,发现嗅觉基因大部分在触角中表达,也有一些在足中表达。
2.通过原核表达方式表达并纯化HarmOBP5、HarmOBP6、HarmPBP1、HarmPBP2、HarmPBP3、HarmCSP5和HarCSP6等蛋白,并进行了荧光竞争结合试验。
3.通过电生理反应(EAG)和风洞试验观察了棉铃虫对结合试验反应强烈的10种气味物质的行为反应。
4.利用表面等离子体共振技术(SPR)和双偏振光干涉测量技术(DPI)研究了嗅觉相关蛋白与气味小分子之间的相互作用。
5.通过软件模拟预测出棉铃虫嗅觉相关蛋白的结构,进行了小分子对接模拟,为后期验证关键氨基酸的作用提供了理论依据。
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