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鹿茸提取物活性成分检测及其生物效应研究

田丽丽  
【摘要】:目的旨在确定鹿茸中活性成分含量,评价鹿茸对小鼠免疫功能和神经元的影响及其对肝脏的保护作用。为合理利用鹿茸提供理论依据。 方法①昆白小鼠72只,随机分为正常组(灌胃生理盐水,n=18),高、中、低剂量组(灌胃鹿茸冻干粉1、3、5g/kg,n=18),灌胃9周(63d)后处死,取材,分析生理生化指标。②鹿茸中活性成分的检测。用Bradford法测定蛋白质含量,用高效液相色谱法测定唾液酸含量,用试剂盒测定胆固醇含量。③鹿茸对小鼠免疫系统的影响。采用MTT法测定小鼠脾脏淋巴细胞增殖转化功能的作用,采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红试验测定鹿茸对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响,测定小鼠脾脏指数。④鹿茸对小鼠神经系统的影响。用试剂盒检测脑组织中SOD、GSH-px、MAO活性和MDA含量,采用免疫组化法测定小鼠大脑皮层促凋亡蛋白Bax和凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达量。⑤鹿茸对小鼠肝脏的保护作用。测定小鼠的肝脏中SOD、GSH-px活性和MDA含量,采用免疫组化法测定肝脏中Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达量,用试剂盒检测灌服56%乙醇溶液12h后小鼠血清中AST、ALT活性和TB含量。组织材料用4%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,HE染色。 结果①蛋白质测定标准曲线方程为y=0.9314x-0.0319(r=0.9926,P0.01),鹿茸干物质含量为19.23%,样品中蛋白质浓度为14.96mg/ml,占鹿茸干重的24.93%;唾液酸检测标准曲线方程为y=1.7284x+13.609(r=0.8662,P0.05),样品中唾液酸含量为1.37μg/ml,占鹿茸干重的0.02%;胆固醇含量为0.40μg/ml,占鹿茸干重的0.0059%。②高剂量鹿茸(5g/kg)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用明显高于低剂量组和对照组(P0.01),中剂量组高于低剂量组和对照组(P0.05);高剂量组小鼠脾脏指数显著高于对照组(P0.05),中剂量鹿茸对小鼠T淋巴细胞增殖转化功能的增强作用极显著(P0.01),对小鼠B淋巴细胞增殖转化功能的增强作用显著(P0.05)。③高剂量组脑组织中MAO含量极显著低于对照组和中、低剂量组(P0.01),中剂量组MAO含量极显著低于对照组和低剂量组(P0.01),高剂量组GSH-Px极显著高于对照组和中、低剂量组(P0.01),高剂量组Bcl-2蛋白表达量极显著高于对照组和中、低剂量组(P0.01),低剂量组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组和高、中剂量组(P0.05);④高剂量组肝脏中SOD活性极显著高于对照组和中、低剂量组(P0.01),中剂量组MAO活性显著高于对照组和低剂量组(P0.05),高剂量组GSH-Px活性显著高于对照组和中、低剂量组(P0.05),对照组MDA含量极显著高于高、中、低剂量组(P0.01),低剂量组MDA含量极显著高于中、高剂量组(P0.01),高剂量组肝脏中Bcl-2蛋白表达量显著高于对照组和中、低剂量组(P0.05),高剂量组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组和中、低剂量组(P0.01),小鼠肝脏HE染色图片看,除正常组小鼠肝脏细胞结构清晰、完整,高、中、低剂量组和对照组小鼠肝脏在酒精作用下,细胞肿胀、颗粒变性,细胞质内有红色颗粒,细胞膜受损,肝细胞脂肪变性,肝窦隙聚集较多红细胞,部分肝细胞坏死,可见炎性细胞。酒精损伤后高、中剂量鹿茸组小鼠血清中AST、ALT的活力都显著低于低剂量组和对照组(P0.05)。 结论①鹿茸中干物质含量为19.23%,蛋白质含量占鹿茸干重的24.93%,唾液酸含量占鹿茸干重的0.02%,胆固醇含量为0.0059%。②中鹿茸剂量(3mg/kg)对机体细胞免疫具有增强作用,对吞噬细胞功能有增强作用,对机体体液免疫增强作用不明显。③高剂量鹿茸(5mg/kg)可减轻神经细胞的氧化损伤,抑制神经细胞凋亡。④高剂量鹿茸(5mg/kg)可以减轻肝细胞的氧化损伤,抵抗肝细胞凋亡,对酒精肝具有保护作用。


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