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皱纹盘鲍肠道益生菌的筛选与应用研究

姜海峰  
【摘要】:益生菌作为抗生素的替代手段已被广泛接受,肠道菌群由于其对机体健康生长和抗病的重要作用,是筛选益生菌的重要来源。本研究在皱纹盘鲍肠道菌群进行分析的基础之上,对健康皱纹盘鲍肠道菌群采用体外产酶、拮抗与体内生长试验的方法从中筛选到两株益生菌,并进行生产应用试验和安全性评价。同时研究其在饲料中添加投喂对皱纹盘鲍免疫机能和抗病力的影响,以期为皱纹盘鲍苗种生产专用微生态制剂创制奠定理论基础。该项目的研究,对提高皱纹盘鲍苗种产量并实现绿色生态养殖具有重要的意义。 本研究取得了以下几个成果: 1.比较分析养殖和野生皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)不同个体间肠道菌群数量和种类组成,并采用PCR-DGGE指纹技术对比分析了二者肠道优势菌群的差异。结果表明:养殖和野生皱纹盘鲍肠道好氧及兼性厌氧菌总数分别为3.50±0.85×106cfu/g,3.03±1.10×106cfu/g;两组鲍鱼肠道优势菌基本相同,均为弧菌属(Vibrio),次优势菌均为玫瑰杆菌属(Roseobacter)和希瓦氏菌属(Shewanella)。在养殖组中检测到芽胞杆菌属(Bacillus),表明环境因素对皱纹盘鲍肠道细菌组成有一定的影响。同常规培养得到的结果吻合,二者的PCR-DGGE指纹图谱相似度很高,表明皱纹盘鲍对肠道细菌具有特异选择性。 2.采用拮抗实验和产酶实试验从124株不具有溶血活性的鲍鱼肠道细菌中筛选到5株潜在益生菌,对潜在益生菌进行鉴定和安全性评价,进一步将潜在益生菌(1010cfu g-1)进行为期120d的幼鲍饲喂试验,随后对得到的益生菌进行的生产应用试验。结果表明,筛选到的潜在益生菌Shewanella colwelliana WA64、Shewanella olleyana WA65能够提高幼鲍的存活率和生长性能,复合作用能够显著提高幼鲍增重率和存活率(P0.05),并在生产条件下明显降低幼鲍死亡量。抗生素敏感性检测表明益生菌不含耐药因子。 3.将益生菌WA64和WA65添加到饲料中(109cfu g-1)饲养鲍鱼28d,通过测定不同时间处理后试鲍的免疫机能和抗病力。结果表明,益生菌处理组的细胞及体液免疫机能均有不同程度的增强,与对照组相比,WA64和WA65在不同的饲喂时间内显著增加了血细胞数目、增强了吞噬活力、提高了呼吸爆发活力(P0.05);提高了溶菌酶活力并增加了总蛋白含量(P0.05);WA64、WA65均能显著降低鲍鱼的死亡率(P0.05)。


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