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DHA对草鱼前体脂肪细胞及线粒体发育影响的初步研究

黄吉芹  
【摘要】:由于高脂日粮的使用和集约化养殖的推广,草鱼腹腔内脂质过度蓄积,严重影响了草鱼自身的健康状况和品质。二十二碳六烯酸(Docosahexaenic Acid, DHA)在脂肪细胞发育过程起到重要的调控作用,研究表明DHA对抑制脂质蓄积有重要影响,但具体的作用机制尚未有定论,因此研究DHA对草鱼脂肪细胞发育的影响意义重大。通过细胞培养技术,离体状态下,研究DHA对脂肪细胞发育各个阶段(增殖,分化,凋亡和水解)影响的机制,有助于深入了解鱼类能量代谢的分子机理。 本试验以草鱼为研究对象,从细胞发育阶段入手,初步检测了离体条件下DHA对草鱼前体脂肪细胞及线粒体发育的影响,得出如下结果: 1.克隆得到草鱼Bcl-2cDNA序列及水解基因ATGL (Genbank登录号HQ845211),凋亡相关基因Bax(Genbank登录号JQ793788),Caspase3(Genbank登录号JQ793789)和Caspase9(Genbank登录号JQ793787),及线粒体相关基因Nrf-1(Genbank登录号JF939202),CPT-1A(Genbank登录号JF728839),PCNA(Genbank登录号JX524136), TFAM (Genbank登录号JX855839)和CS(Genbank登录号JQ713861)的部分cDNA片段,其长度分别为1292bp、687bp、417bp、588bp、783bp、481bp、642bp、513bp、492bp和1035bp。 2.分别检测Bcl-2和ATGL基因的组织差异表达,发现Bcl-2基因在脂肪组织、肾脏和精巢中的表达量显著高于其它各组织,在脑和肠的表达次之,在心的表达较低。ATGL基因在脂肪组织表达量最高,在肝胰脏、肌肉中表达量次之,在其他组织表达量较低。 3. DHA处理草鱼脂肪细胞后,发现DHA促进了脂肪细胞的增殖。油红O染色结果显示DHA抑制脂肪细胞分化,DHA处理使GPDH活性下降。DHA短时间促进细胞凋亡,之后抑制凋亡,与LDH活性和凋亡基因的表达一致。DHA处理后,甘油释放量升高,与ATGL基因表达一致。DHA处理后,MDA含量升高,SOD活性升高。 4. DHA处理草鱼脂肪细胞后,线粒体数量增加,增加线粒体中DHA含量,对线粒体膜电位无影响。 通过以上研究,表明DHA可通过抑制细胞分化、促进细胞凋亡、促进细胞水解、增加线粒体数量来降低脂肪细胞数量和脂质含量,从而降低脂质蓄积。


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