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抗病毒多糖筛选、提取及其对烟草花叶病毒病的抑制作用

沈小英  
【摘要】:烟草是我国重要的经济作物之一,在农业生产中有着十分重要的作用。但是病虫害每年都会给烟草生产造成严重的经济损失,所以,烟草病虫害防治研究是农业工作者的研究重点。烟草花叶病是烟草的主要病害之一,危害严重而且难以防治,现阶段的主要防治手段依然是大量施用化学农药。但化学农药大量使用带来了化学农药残留和环境污染等问题,威胁着人类健康和生态平衡。因此,应贯彻“防治为主,综合防治”的方针,减少化学农药使用,致力于无公害天然产物农药的研究。本研究以烟草花叶病为防治对象,旨在筛选得到高效的抗病毒多糖,并研究其对烟草生长的影响,优化其发酵提取条件,以期获得防治烟草花叶病的新型微生物农药资源。 本实验采用枯斑半叶法,从12种供试多糖中筛选得到了四种对TMV具有良好抑制作用的多糖,分别是云芝多糖、虫草多糖、蜜环菌多糖和猪苓菌多糖。四种多糖液喷施48h后接毒处理的预防效果较好,均在85%以上;特别以1g/L云芝多糖处理的预防效果最佳,高达92.12%。云芝多糖处理普通烟NC-89后,对其主要病毒病(TMV、CMV和PVY)具有良好的防治效果,最高防效均在50%以上;特别以对TMV的相对防效最佳,当浓度为2.0g/L时,相对防效高达65.25%。实验还发现,云芝多糖可以延迟烟草病毒病的发病时间,有利于烟苗的生长。 本实验通过温室和小区试验证实云芝多糖能影响烟苗生长,提高烟叶的产量和品质。处理后,烟苗健壮整齐,叶片浓绿光滑。1g/L云芝多糖处理后,烟苗地上部鲜质量和最大叶面积增加显著,分别较对照提高30.98%和19.74%。小区实验中,烟株的株高、最顶部叶面积、茎围、小区产量和中上等烟比例均有所提高,1g/L云芝多糖处理后,中上等烟比例较对照提高17.20%。 本实验测定结果表明,培养基种类、装液量和培养时间均会影响菌丝体产量。②号培养基的菌丝体产量最高,菌丝体干重可达1.241×10~(-2)g/mL;较小的装液量更有利于云芝HZ-186菌丝体的生长;培养时间对菌丝体产量影响显著,培养第8天菌丝体干重最大,随后开始下降。 本实验通过单因素和正交设计试验发现,浸提时间、提取温度及料液比均与多糖得率呈正相关关系。提取温度和浸提时间对多糖得率影响显著,提取温度在50℃到80℃这一阶段,多糖得率升高明显;浸提时间增加到5h后多糖得率增加变缓;随着料液比增加多糖得率增幅逐渐减小。最终得到云芝HZ-186菌丝体多糖的最佳提取条件为A_2B_3C_3,即料液比为1:20,浸提时间为5h,提取温度为95℃。


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