产萱草根素内生真菌的分离鉴定及其对中毒小鼠的病理学观察

【摘要】：萱草属（Hemerocalis L.）植物在我国西部地区广泛分布，其中有些品种的根能使羊和牛发生以双目失明和神经性症状为主的中毒病，严重者甚至导致死亡，直接危害当地畜牧业生产。萱草根的主要毒性成分是蒽醌类化合物——萱草根素（Hemerocallin），其中毒机理尚不明确。本研究以采自陕西长安县的北萱草根为研究对象，对其进行内生真菌的分离及鉴定，从中筛选出一株产萱草根素的的内生真菌，并用该菌的菌丝和北萱草根粉分别对小白鼠进行毒性试验，观察动物的病理组织学变化，将为萱草根素中毒机理奠定基础。 1．本研究对北萱草根进行内生真菌的分离纯化，得到4株菌，经薄层色谱和紫外分光光度法检测，筛选出一株能够产萱草根素的内生真菌，命名为XC-1A。形态学观察发现，菌落白色、圆形、扁平、中央凸起，气生菌丝较密集。经rDNA-ITS序列分析技术、NJ法构建系统发育树并分析其亲缘关系，鉴定该株菌为Zalerion varium。 2．将北萱草根样品和XC-1A菌丝分别进行氯仿热回流，均得到萱草根素粗提物。再将粗体物分别进行紫外扫描后，根据标准曲线方程计算出萱草根和XC-1A菌丝中萱草根素含量分别为5.54μg/g和359.88μg/g。 3．将小白鼠随机分为3组，每组16只，三组分别按每天4~6g的剂量饲喂全价饲料、添加萱草根粉的饲料和添加菌丝粉末的饲料。每天给小鼠饲喂萱草根素对其的半数致死量，约0.063mg/20g，根据萱草根植物和菌丝中的萱草根素含量，即每只小鼠每天饲喂草粉0.5g，菌丝0.1751g，进行小鼠毒性实验。结果显示，试验组动物均有明显的临床症状，对照组动物无任何症状出现。 4．中毒动物表现出精神沉郁，行动迟缓，喜伏卧，食欲减少等症状。剖检可见心脏、肝脏、脾脏、肾脏呈红褐色肿大，大脑脆性增加，膀胱扩张，充满桔黄色尿液。对小鼠内脏器官和大脑进行HE染色观察，肾小管上皮细胞、肝细胞肿胀、破裂，肺泡壁毛细血管扩张，充满红细胞，脾脏淋巴细胞增生，心肌纤维变性，间质小血管扩张、充血，脑组织结构疏松，大脑神经细胞肿胀。