收藏本站
收藏 | 论文排版

猪肌内脂肪细胞分化过程miRNA的鉴定及miR-34c的功能研究

陈粉粉  
【摘要】:肌内脂肪含量作为评价肉质品质的主要指标,在产肉动物生产中愈来愈受到重视。提高肌内脂肪含量改善猪肉品质,是猪育种工作者近年来的主要研究方向。遗传、营养和肌肉中脂肪细胞的生长发育等均可影响肌内脂肪含量。体外培养肌内脂肪细胞从细胞和分子水平研究其生长和调控机制可为畜牧生产提供基础数据。MicroRNA(miRNA)是长度为19-22个核苷酸的非编码小RNA,主要通过对基因进行转录后调控发挥作用。目前,对脂肪和肌肉组织miRNA的鉴定在家畜上报道较多,但仍有诸多影响猪肌内脂肪沉积的miRNA有待鉴定,功能尚需研究。此前,猪肌内脂肪细胞体外培养研究组织来源为半腱肌和背最长肌的均有报道,但在成脂能力的研究结果上存在较大差别。因此,本研究利用差速贴壁法分离培养来源于半腱肌和背最长肌的猪肌内脂肪细胞,采用高通量测序方法分析猪肌内脂肪细胞分化前后差异表达的miRNAs,并利用过表达、real-time qPCR、Western blot、双荧光素报告酶系统和流式细胞术等技术深入探讨miR-34c对猪肌内前体脂肪细胞增殖分化的影响及其作用机制。本研究得到以下主要结果:1.L-IMA较S-IMA有更强的分化聚脂能力形态学观察和TG含量测定结果表明,L-IMA(intramuscular preadipocytes from porcine longissimus muscles,分离自背最长肌的脂肪细胞)和S-IMA(intramuscular preadipocytes from porcine semitendinosus muscles,分离自半腱肌的脂肪细胞)相比有更强的成脂分化能力,L-IMA分化为成熟脂肪细胞数目和TG存储量均高于S-IMA;分子水平的检测表明PPARγ、SREBP-1、C/EBPs和FABP4在L-IMA中高表达;说明来源自不同解剖部位的肌肉分离的肌内前体脂肪细胞在相同的成脂诱导培养条件下分化为成熟脂肪细胞的能力不同。2.成脂关键信号通路AKT、mTOR和ERK1/2的磷酸化水平在S-IMA中被下调(P0.05)。3.高通量测序检测L-IMA和S-IMA分化不同时期的miRNAs,对样品中已知miRNAs的分析结果表明,Ld0、L2、L8、S0、S2和S8中各已知miRNA分别有525、521、543、533、552和545;预测得到Ld0、L2、L8、S0、S2和S8中各有1428、1295、789、1572、1184和1081个新miRNA。4.差异表达分析表明21个已知miRNAs在猪肌内脂肪细胞分化中呈现相同变化趋势,其中含9个上调的miRNAs和12个下调的miRNAs。5.过表达miR-34c抑制猪肌内脂肪细胞分化miR-34c序列在多个物种间高度保守,生物信息学分析其靶基因的功能发现,其主要参与的信号调控通路包含MAPK、PI3K/AKT和mTOR等,其中多条信号通路与脂肪生成密切相关。过表达miR-34c使分化标志基因PPARγ、FABP4和FASN在mRNA水平极显著下调(P0.01),蛋白表达的检测结果显示PPARγ和FABP4和FASN被显著下调(P0.05),表明过表达miR-34c抑制猪肌内前体脂肪细胞分化。6.双荧光素报告酶验证E2F3和KLF4是miR-34c的靶基因。7.过表达miR-34c抑制猪肌内脂肪细胞增殖过表达miR-34c抑制了细胞周期蛋白Cyclin B的表达;流式细胞检测结果显示miR-34c过表达组G2期细胞比例增加(P0.05),S期细胞比例比对照组显著降低(P0.01);过表达miR-34c显著的抑制了细胞活性(P0.05)。总之,本研究系统比较了分离自猪不同部位肌肉的肌内前体脂肪细胞在分化过程中的差异,丰富了调控猪肌内前体脂肪细胞分化的已知miRNA的数量,并完善了对miR-34c生物学功能的全面认识。研究结果对进一步研究miRNA影响猪肌内脂肪沉积性状形成的机制提供了基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李长强;闫益波;高士争;;猪的肌内脂肪生成及其调控[J];饲料工业;2007年07期
2 廉红霞;高腾云;傅彤;孙宇;李改英;;家畜肌内脂肪代谢机制研究进展[J];江西农业学报;2011年05期
3 李博;李伟;王恬;;肌内脂肪细胞生长及调控因子的研究进展[J];食品工业科技;2013年22期
4 孙好学;田云;何宏轩;王俊东;;肌内脂肪酸影响因素和侯选基因研究进展[J];动物医学进展;2006年11期
5 张伟力;曾勇庆;;猪肉肌内脂肪测定方法及其误差分析[J];猪业科学;2008年07期
6 包丽华;包金宝;;猪肌内脂肪的研究进展[J];中国牧业通讯;2009年01期
7 胡耀华;郭康权;野口刚;佐竹隆显;;近红外光谱测定猪眼肌肌内脂肪中脂肪酸含量[J];光谱学与光谱分析;2009年08期
8 郭添福;苏州;郭礼荣;黎晶耀;;猪肌内脂肪酸成分的研究进展[J];畜牧市场;2010年01期
9 张宏宇;单安山;徐林;郑燕斌;;猪肌内脂肪调控研究进展[J];东北农业大学学报;2010年02期
10 曲桂娟;秦贵信;;肉牛肌内脂肪的研究进展[J];中国畜牧兽医;2010年06期
11 郭添福;苏州;郭礼荣;黎晶耀;;猪肌内脂肪酸成分的研究进展[J];江西饲料;2010年01期
12 陈亮;黄英;赵素梅;高士争;;猪肌内脂肪沉积相关功能基因的研究进展[J];云南农业大学学报(自然科学版);2010年05期
13 董丹萍;马俪珍;;牛肌内脂肪的研究进展[J];农产品加工;2010年08期
14 谭林;姜海龙;;猪肌内脂肪的研究进展[J];畜牧与饲料科学;2010年09期
15 韦克林;胡天龙;李坤;;肌内脂肪、脂肪酸与猪肉肉质三者关系研究进展[J];中国畜牧兽医文摘;2012年11期
16 王小舟;;猪肌内脂肪沉积的影响因素及其研究进展[J];中国猪业;2013年05期
17 曲桂娟;祁宏伟;孟轲音;董晓庆;裴志花;刘树明;秦贵信;;肉牛肌内脂肪沉积相关基因的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2013年21期
18 赵素梅;高士争;;猪肌内脂肪细胞分化过程中脂类相关基因表达[J];畜牧与兽医;2012年S1期
19 董小英;唐胜球;;日粮因素调控猪肌内脂肪沉积的研究进展(一)[J];广东饲料;2014年02期
20 杜新;罗光彬;王泽英;方雪松;;肉牛肌内脂肪沉积相关基因的研究[J];现代畜牧兽医;2014年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马现永;林映才;蒋宗勇;;猪肌内脂肪调控研究进展[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
2 汪秀星;陈杰;刘红林;;猪肌内脂肪沉积相关基因的差异显示反转录PCR鉴定[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3 王忠刚;朱晓彤;周桂炫;高萍;束刚;江青艳;;猪骨骼肌细胞对肌内脂肪聚脂和基因表达的旁分泌调控[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
4 马现永;林映才;蒋宗勇;;猪肌内脂肪调控研究进展[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
5 赵素梅;高士争;;猪肌内脂肪细胞分化过程中脂类相关基因表达[A];全国动物生理生化第十二次学术交流会论文摘要汇编[C];2012年
6 郑程莉;徐刚毅;汪代华;;羊肉肌内脂肪及影响因素的研究进展[A];中国畜牧兽医学会养羊学分会全国养羊生产与学术研讨会议论文集[C];2010年
7 汪仕奎;蒋宗勇;林映才;郑春田;王丽;杨雪芬;高开国;;猪肌内脂肪细胞活性氧代谢及影响机制探讨[A];“生泰尔”杯全国养猪技术征文大赛——中国畜牧兽医学会养猪学分会五届三次理事会暨生猪产业科技创新发展论坛论文集[C];2012年
8 黄爱霞;卢立志;;鸡肌内脂肪相关基因的研究进展[A];中国家禽科学研究进展——第十四次全国家禽科学学术讨论会论文集[C];2009年
9 胡耀华;郭康权;铃木孝范;野口刚;河野澄夫;佐竹隆显;;近红外光谱测定袋装猪眼肌肌内脂肪中脂肪酸的研究[A];第十五届全国分子光谱学术报告会论文集[C];2008年
10 边连全;王瑞年;杨爽;刘显军;孙孝;胡心宽;;肌内脂肪对猪肉品质的影响研究[A];第八届沈阳科学学术年会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈粉粉;猪肌内脂肪细胞分化过程miRNA的鉴定及miR-34c的功能研究[D];西北农林科技大学;2017年
2 郭兵;肉牛肌内脂肪和相关功能基因集相互关系的生物信息学分析[D];南京农业大学;2015年
3 赵存真;MAT2A/2B调控猪肌内脂肪细胞成脂分化的作用及分子机理[D];西北农林科技大学;2016年
4 张涛;京海黄鸡脂肪沉积关键基因的筛选[D];扬州大学;2017年
5 褚维伟;猪肌内脂肪和皮下脂肪的糖皮质激素敏感性差异及其机理初探[D];南京农业大学;2016年
6 孙文星;二花脸猪皮下与肌内脂肪组织基因表达谱比较及脂肪差异沉积调控机制初探[D];南京农业大学;2013年
7 姚焰础;苏尼特羔羊肌内脂肪细胞分化相关因子和肌内脂肪代谢关键酶基因表达发育规律的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
8 廉红霞;猪肌内脂肪代谢信息传导途径相关因子研究[D];内蒙古农业大学;2007年
9 陈银基;不同影响因素条件下牛肉脂肪酸组成变化研究[D];南京农业大学;2007年
10 陈其美;猪肌内脂肪沉积相关基因的筛选鉴定及其特征分析[D];山东农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马建爽;沙棘黄酮调控肉仔鸡肌内脂肪沉积的研究[D];中国农业科学院;2015年
2 王红杨;胚胎期至生长早期鸡肌肉发育及肌内脂肪沉积蛋白质组研究[D];中国农业科学院;2015年
3 南文婷;miR27b通过靶向PPARγ调控脂肪在皮下脂肪细胞与肌内脂肪细胞中的差异沉积[D];南京农业大学;2014年
4 张恬;猪肌内脂肪全基因组甲基化差异分析及候选基因研究[D];中国农业科学院;2016年
5 张良;转DGAT1基因小鼠与野生型小鼠腓肠肌差异表达基因的筛选与分析[D];华中农业大学;2016年
6 谷淑华;猪NCOA3启动子甲基化对其在肌内脂肪与皮下脂肪组织差异表达的影响[D];南京农业大学;2015年
7 戴瑨;基于高通量测序技术对牛背最长肌肌内脂肪沉积能力的研究[D];山东农业大学;2015年
8 席静宁;肌联素对猪肌内脂肪细胞分化及脂肪酸利用的调控研究[D];西北农林科技大学;2017年
9 汪秀星;猪肌内脂肪沉积相关调控基因的分离与鉴定[D];南京农业大学;2008年
10 田磊磊;脂联素在皖南花猪脂肪中的表达及对肌内脂肪的影响[D];安徽农业大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 胡唯元;畜禽:让它咋长就咋长[N];科技日报;2004年
2 记者 陈凤来通讯员 王贵锁;2万父母代变30万商品猪[N];河北日报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978