脯氨酸对猪精液常温保存效果的研究

【摘要】：猪精液在常温保存中,伴随着能量的消耗,会有活性氧自由基累积,降低精液品质,影响精液保存效果。实践生产中,外源添加保护剂可以延长猪精液的保存时间,改善精液品质。本试验通过在猪精液常温保存过程中添加不同浓度的脯氨酸,使用计算机辅助精子分析系统(CASA)、荧光显微镜、多功能酶标仪检测、蛋白质免疫印迹等方法,探究脯氨酸对猪精液常温保存效果的影响和机制,主要研究结果如下:1.猪精液常温保存过程中添加脯氨酸,可以改善猪精液的保存效果,且脯氨酸的最佳添加浓度为75 mmol/L。常温保存第五天,75 mmol/L处理组可以提高精子活率和运动精子所占百分比(P0.05),处理组精子质膜和顶体完整率、线粒体膜电位显著高于空白对照组(P0.05),表明脯氨酸对猪精液常温保存具有保护作用。2.在猪精液常温保存第五天,75 mmol/L处理组精子细胞内氧自由基(ROS)水平和脂质过氧化(LPO)程度显著低于对照组(P0.05),还原性谷胱甘肽(GSH)水平、精子细胞内过氧化氢酶(CAT)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于对照组(P0.05),75 mmol/L处理组精子细胞凋亡程度低于对照组,表明脯氨酸可能通过自身的抗氧化能力在猪精液常温保存过程中发挥作用;同时,75 mmol/L处理组精液ATP水平显著高于对照组(P0.05),以及精子细胞中脯氨酸脱氢酶的存在,表明脯氨酸可能参与了精子细胞代谢,为猪精液常温保存过程提供了ATP。3.在猪精液中外源加入过氧化氢37℃孵育2 h,精子活率、运动精子所占百分比等CASA检测得的猪精子细胞动力学参数以及质膜和顶体完整率、线粒体膜电位显著降低(P0.05),精子细胞LPO水平和ROS含量明显上(P0.05),75 mmol/L脯氨酸处理后,CASA检测得的猪精子细胞动力学参数明显提高(P0.05),处理组精子细胞质膜和顶体完整率、线粒体膜电位显著高于对照组(P0.05),LPO水平和ROS的含量明显降低(P0.05),进一步说明脯氨酸可能通过自身的抗氧化能力对猪精子起到保护作用。综上所述,本研究表明脯氨酸可通过自身的抗氧化能力对猪精液的常温保存发挥保护作用,且最佳添加浓度为75 mmol/L;同时,脯氨酸也有可能参与了精子细胞的代谢,为细胞的存活提供ATP,延长精液保存时间,改善精液保存品质。