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葡萄无核基因分子标记的研究

杨英军  
【摘要】: 1.18bp特异引物在葡萄品种中的验证 本研究利用探测葡萄无核基因的18bp特异引物,运用RAPD技术成功地 对37个有核和无核葡萄品种的无核基因存在与否进行了分子诊断。结果充分 证明由UBC-269-484序列设计并合成的18bp特异引物确实具有检测葡萄无 核基因的功能。 2.RAPD标记的克隆、测序及SCAR标记的转换 对18bp扩增产生的约590bp特异片段进行回收、克隆及双向测序,获 得了该片段的全部序列,该序列全长为569bp。经PC-gene软件分析,设计 并合成了两对特异引物,即P_1+P_3和P_2+P_3,P_1、P_2和P_3的序列分别是:5′CTC ATC TTC TTG ATG GTG AT3′,5′GAC CAG TCT GCA CTT ACA GT 3′,5′AAG TGA AGA ACA TCA TTA AGA AC 3′,并对全部供试品种进行PCR扩增,获得了两 个特异片段约530bp和500bp,以该两片段出现与否准确地区分了葡萄有 核与无核。这样,成功地将RAPD标记转换为SCAR标记。 3.RAPD标记和SCAR标记在葡萄无核育种上的应用 利用RAPD标记和SCAR标记对尚未结果的五个有核×无核杂交组合共165 个单株进行了果实有核、无核性状的预先选择,达到了分子标记辅助葡萄无 核选择的目的。 4.Southern blot检测葡萄无核基因 将葡萄无核基因的RAPD标记序列进行PC-gene软件酶切位点分析,选用 HindⅢ和SpeⅠ两种内切酶对重组质粒进行双酶切处理,获得了310bp片 段,经回收纯化、DIG-标记后制成了探测葡萄无核基因存在与否的杂交探针; 并用该探针成功地对无核白、红地球等七个优良葡萄品种进行了Southern blot分析,达到了区分葡萄有核与无核品种的目的。


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