收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

稻瘟菌插入突变体库的构建及产孢缺陷兼生长缓慢型突变体的分子遗传学研究

王刚  
【摘要】: 稻瘟菌为单倍体异宗配的合子囊菌,由其引起的稻瘟病是世界范围内危害水稻生产的一种重要病言。稻瘟病系统中,病菌与水稻间的互作符合基因对基因关系。稻瘟菌无毒基因和致病相关基因的克隆有助于解析稻瘟菌的致病专化性和致病机制。 本研究利用限制性内切酶介导的整合技术构建了迄今世界上最大的含有27063个转化体的稻瘟菌插入突变体库。所用的稻瘟菌Y34菌株经过对19个鉴别品种的致病性鉴定表明,该病菌含有13个无毒基因。构建含有编码潮霉素磷酸转移酶基因的双元载体pV2,该载体可以同时利用8种限制性内切酶进行转化。液体完全培养基摇培分生孢子40小时获得菌丝团,崩溃酶Drislease酶解3小时后获得最大量的原生质体,PTC滴加前后冰浴时间分别为20分钟和28分钟可以获得最佳转化效果。8种内切酶HindⅢ、SalⅠ、SacⅠ、SmaⅠ、EcoRV、ApaⅠ、XhoⅠ、KpnⅠ的最佳转化浓度分别为30、20、20、20、20、20、30和20单位每皿。研究发现不同内切酶的转化效率不同,上述8种内切酶的最佳转化效率分别每皿48、48、35、17、14、39、30、27个转化体,平末端内切酶较粘性末端内切酶转化效率低。利用上述8种酶转化稻瘟菌获得的转化体数分别为3256、2956、2760、1443、2038、2996、2689、2827个。 为衡量插入突变体库的质量,从上述8种内切酶介导的转化体中分别随机抽取13个转化体,分别利用内切酶BglⅡ(质粒PV2上不含酶切位点)和相应的介导酶酶切进行Southern分析,结果表明,不同内切酶介导的转化体中质粒插入情况不同,质粒的插入共有多位点多拷贝、单位点多拷贝、单位点单拷贝以及质粒缺失插入四种类型,上述8种酶介导的转化体中,单位点插入的比例分别为 84o、83O、61o、92o、77O、77O、61o、92O,相应的单拷贝插入比例分别 为 69%、83%、54%、23%、15%、46%、46%、92%。不同酶介导的转化效率与 插入类型没有相关性。单位点插入比例与所用的内切酶切割方式无关,但是,粘 性末端内切酶介导的转化体中单拷贝插入和 REMI插入比例高于平术端内切酶 介导的比例。整个突变体库中,77%的单位点插入表明此突变体库有利于克隆相 ___I 关基因。1 此外,利用质粒 psacl 刁和 pCB 004,分别以 Sail 和 EcoAI 为介导酶转化稻 瘟菌 131菌株和 Y34菌株,分别获得 3995和 2012个转化体。 对稻瘟菌 131的一个 REMI突变体 H6进厅分子遗传学研究。鉴定其突变表 型,表明H6为产泡缺陷兼生长缓慢型突变体。Southern分析表明,此突变是由 转化质粒单拷贝插入的结果。将H6与相反交配型菌株1528有性杂交,分离出 ZI个子囊泡于,突变表型与野生表型比例为1:l,表明此突变表型山单基因控 制。潮霉素抗性与突变表型共分离表明外源质粒插入到基因的编码区。通过质粒 拯救获得插入位点侧翼基因组序列,部分测序和同源性比较显示其与其他己经报 道的基因没有同源性。暗示可能为一个新的基因,利用此序列筛选稻瘟菌基因组 文库,获得5个阳性克隆。此基因的克隆正在进行中。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王宗华;福建稻瘟菌的群体遗传规律[J];植物病理学报;1998年02期
2 伍光庆,叶华智,李崇云,袁永凯;稻瘟菌菌体可溶性蛋白和同工酶的凝胶电泳分析[J];四川农业大学学报;1996年04期
3 秦引萍;稻瘟菌侵染诱导性脂肪酸加氧酶的鉴定、纯化及其性状分析[J];植物病理学报;1997年01期
4 沈瑛,朱培良,袁筱萍,赵新华,M.Levy;我国稻瘟病菌的遗传多样性及其地理分布(英文)[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);1998年05期
5 鲁国东,王宝华,赵志颖,郑学勤,谢联辉,王宗华;福建稻瘟菌群体遗传多样性RAPD分析[J];福建农业大学学报;2000年01期
6 周英福,刘续跃;用稻秆长期保存“稻瘟菌”[J];植物保护;1984年04期
7 王宝华,鲁国东,张学博,谢联辉,王宗华,袁筱萍,沈瑛;福建省稻瘟菌的育性及其交配型[J];福建农业大学学报;2000年02期
8 李宏宇,鲁国东,王宗华;稻瘟菌无毒基因研究进展[J];中国生物工程杂志;2003年06期
9 葛秀春,宋凤鸣,郑重,瞿海旦;BTH诱发水稻对稻瘟病的系统获得抗性[J];浙江农业学报;1999年06期
10 魏士平,王扬,刘耀光,国立耘,李家瑞,彭友良;稻瘟菌TAC文库的构建与评价(英文)[J];植物病理学报;2003年01期
11 秦引萍,杨依军,彭友良,曾士迈;稻瘟菌侵染诱导性水稻脂氧合酶的同工酶鉴定及性状分析[J];农业生物技术学报;1996年02期
12 黄俊丽,王贵学,彭友良;稻瘟菌致病性变异突变体的筛选及共分离分析[J];重庆大学学报(自然科学版);2005年05期
13 张会敏;姜民国;冯友军;;稻瘟菌Ⅰ型烯醇化酶基因全长cDNA的电子克隆(英文)[J];生物信息学;2006年02期
14 侯占军,彭友良;稻瘟菌诱导的稻叶脂氧合酶的纯化及部分氨基酸序列测定[J];植物病理学报;1999年01期
15 张淑平,苏生昌,李多川,彭友良;稻瘟菌诱导的水稻过氧羟基脂肪酸羟化环化酶的部分纯化[J];农业生物技术学报;1998年04期
16 鲁国东,郑武,阮志平,陈在杰,王宗华;福建稻瘟菌毒性类型组成及其对水稻几个Pi基因的毒性频率[J];植物病理学报;2003年03期
17 谷安宇,赵明富,何月秋;稻瘟菌致病相关基因的研究策略[J];农业与技术;2005年03期
18 纪春艳;李云锋;王振中;;稻瘟菌糖蛋白激发子CSBⅠ纯化过程的优化[J];华中农业大学学报(自然科学版);2007年01期
19 徐锋;武晓丽;邱德文;;利用磁珠构建稻瘟菌cDNA文库[J];微生物学报;2008年06期
20 郑武;陈继圣;郑士琴;刘文德;陈晓;周洁;鲁国东;王宗华;;基因表达分析稻瘟菌7个Rho GTP酶的关系[J];中国农业科学;2006年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 梁喜龙;王艳丽;Burhan;李健;刘金亮;潘洪玉;张世宏;;稻瘟菌染色体共价修饰与毒性分化的关系分析[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 郭士伟;李万昌;彭陈;袁玖辰;张云华;;稻瘟菌Magnaporthe oryzae P-ATPases基因家族分析[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
3 陈铭佳;曾洪梅;邱德文;;一种新型稻瘟菌蛋白激发子的克隆与功能研究[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
4 张志勇;张栋;唐威华;;稻瘟菌侵染引发水稻早期转录谱变化[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年
5 王永崇;蔡丽;侯明生;;湖北省稻瘟菌群体遗传多样性分析[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
6 陈小林;孙静;杨俊;黄金光;王大伟;彭钊;薛敏峰;赵文生;张燕;彭友良;;稻瘟菌PacC-pH信号途径的研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 郭刚;洪葵;胡申才;肖春;阎莉萍;郑服丛;;海洋微生物抗稻瘟菌活性菌株的筛选[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
8 陈小林;孙静;彭钊;薛敏峰;杨俊;赵文生;彭友良;;稻瘟菌响应外界pH信号基因的鉴定[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
9 孙国昌;许志刚;;稻瘟菌的群体遗传结构研究进展[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
10 丁胜利;黄俊丽;魏士平;彭友良;;一个新的锌指蛋白作为稻瘟菌的致病力因子[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 汪滢;稻瘟菌候选致病相关基因的功能验证[D];浙江大学;2010年
2 丁胜利;一个新的锌指蛋白作为稻瘟菌的致病力因子[D];中国农业大学;2004年
3 李爱贞;水稻与稻瘟菌互作的酶学、超微结构及稻瘟菌电泳核型研究[D];湖南农业大学;2000年
4 王刚;稻瘟菌插入突变体库的构建及产孢缺陷兼生长缓慢型突变体的分子遗传学研究[D];西北农林科技大学;2002年
5 李健;线粒体ATP-Lon蛋白酶(MAP1)参与稻瘟菌致病和自身防护的分子证据[D];吉林大学;2013年
6 Raoul Bruno NGUEKO;[D];浙江大学;2004年
7 徐锋;稻瘟菌激活蛋白基因克隆及功能解析[D];中国农业科学院;2006年
8 耿丽华;稻瘟菌诱导性水稻OsFd和OsFNR基因的cDNA克隆与诱导表达[D];山东农业大学;2004年
9 李薇;一个水稻E3泛素连接酶OsBBI1在水稻对稻瘟菌广谱抗性中的作用研究[D];浙江大学;2010年
10 胡海燕;水稻苗/穗瘟防卫反应相关基因的分离与鉴定[D];中国农业科学院;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙义军;稻瘟菌蛋白激发子分离纯化及生物活性[D];湖南农业大学;2010年
2 王艳丽;极端低温对稻瘟菌的选择及其蛋白质组学研究[D];吉林大学;2012年
3 孙庚;水稻抗瘟基因与稻瘟菌无毒基因的分布及稻瘟菌分子检测[D];吉林大学;2012年
4 闫海;一个稻瘟菌新型锌指蛋白基因突变体的生物学特性分析[D];吉林大学;2013年
5 李湘龙;稻瘟菌效应因子的筛选、克隆及其功能研究[D];中南大学;2011年
6 苏贤岩;安徽稻区稻瘟菌小种、种群的鉴定及其寄生适合度研究[D];安徽农业大学;2004年
7 布日汗;剪接因子BBP在稻瘟菌发育过程中的功能分析[D];吉林大学;2012年
8 颜丙强;稻瘟菌(Magnaporthe grisea)T-DNA插入突变体库的构建及其分析[D];华南热带农业大学;2004年
9 李茂华;控制稻瘟菌菌丝生长基因的克隆[D];中国农业大学;2004年
10 张志飞;湖南省稻瘟菌群体遗传多样性研究及水稻品种抗性鉴定[D];湖南农业大学;2002年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 ;稻穗颈瘟的防治误区[N];吉林农村报;2007年
2 ;保护性稻瘟病防治剂——三环唑[N];四川科技报;2001年
3 姜梅林;小麦、玉米、水稻三大作物 重大病虫害防控技术获得突破[N];农民日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978