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转基因农作物荧光PCR检测方法的研究

马荣群  
【摘要】: 近年来,有关转基因及其产品的安全性的争论在国内外愈演愈烈,各国政府纷纷出台一系列的政策、法规,要求对转基因作物进行标识,有些国家对转基因的最低含量做了限定,其阈值大小从1-5%不等。这就要求必须对转基因及其产品进行检测。 常规的检测方法多采用PCR法,如PCR-凝胶电泳、PCR-ELISA等。这些方法普遍存在着PCR产物污染、特异性不高及速度慢等问题。荧光PCR技术是一种新近发展起来的检测技术,它的应用将从根本上解决这些问题。 本研究以转基因标准样品为材料,采用荧光PCR技术,对转基因产品的定性、定量检测方法进行了研究,实验结论如下: 1.收集了国内外商品化的转基因作物品种,并通过查阅有关文献及网站初步确定了各种作物的转基因构建图; 2.于反应体系中引入UNG去污染酶,建立了无污染荧光PCR扩增体系; 3.以植物内源基因18SrRNA为靶标,设计了特异性引物和荧光探针,建立了以18SrRNA基因的扩增与否来判断核酸提取质量好坏的方法; 4.以FAM荧光素为标记,建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa为筛选目标的转基因农作物荧光PCR定性检测体系; 5.分别以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因,建立了转基因大豆及转基因玉米的荧光定量PCR检测体系; 6.克隆了35S,leclin,Pat和CryⅢa四个质粒作为阳性对照。 本论文在国内首次建立了转基因产品荧光PCR定性、定量检测方法,并与深圳匹基生物公司合作推出配套试剂盒,该技术即将取代常规的PCR-凝胶电泳、PCR-ELISA等方法,成为转基因检测领域的主导技术。尤其是入世后,该方法为促进国际、国内转基因产品的交流提供了更加有力的技术保障。


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