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小牛胸腺中胸腺活性因子I(TAF-I)的纯化和鉴定

刘希成  
【摘要】: 本文从小牛胸腺中分离纯化了一种新型活性因子-胸腺活性因子I(Thymusactivity factorⅠ,TAF-Ⅰ),并对其理化性质和生物学活性进行了研究。 500g小牛胸腺经匀浆、冻融、离心和超滤等方法得到了TAF-Ⅰ粗提物。粗提物用Sephadex G-15凝胶柱((1.5cm×100cm)层析,以双蒸水洗脱,流速48mL/h,得到6个洗脱峰,用用E-玫瑰花结实验检测各个峰的生物学活性,发现第Ⅱ峰有较高活性,收集第Ⅱ峰,浓缩后通过DEAE-Sephadex A-25阴离子交换柱(1.5cm×10cm),以0.05~0.5mol/LNH4Ac-HAc(pH5.8)缓冲液线性梯度洗脱,流速30mL/h,得到7个洗脱峰,活性峰6浓缩后进行Sephadex G-10柱(0.8cm×45cm)脱盐,浓缩后通过HPLC柱(ZORBAXExtend-C18反相柱,4.6mm×250mm)纯化。流动相A相为含0.06%TFA的水溶液,B相为含0.06%TFA的乙腈溶液;线性梯度洗脱,流速为0.6ml/min,紫外全波长检测,收集活性峰,浓缩冻干后得到0.92mg TAF-Ⅰ,活性回收率1.2%。 经ESI-MS质谱鉴定,显示TAF-Ⅰ分子量为618.2。紫外扫描和红外光谱分析证明TAF-Ⅰ为一多肽成分。氨基酸组成分析显示它由Ala、Gly、Glu、Gln、Lys、Ser6种氨基酸残基组成。用ESI-MS~n多级串连质谱分析了TAF-I的氨基酸序列,获得其序列信息,并成功的推导出TAF-Ⅰ的序列。ESI-MS质谱法对多肽和蛋白的鉴定和结构分析,其精确度及分辨率都超过了常规方法。 E-玫瑰花结和MTT等体外生物学活性实验证明,TAF-Ⅰ能显著促进人外周血淋巴细胞的E-玫瑰花结的形成率和促进小鼠脾淋巴细胞的分裂增殖,且这种促进效应具有明显的剂量-效应依赖关系。与目前临床上应用的胸腺肽制剂相比,TAF-Ⅰ极微的剂量就能达到相当的促进效应,具有极高的研究和应用价值。


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