马铃薯（Solanum tuberosum L.）愈伤组织培养和耐盐突变体的离体筛选

【摘要】： 本试验以费乌瑞它、东农303、下波帝、鄂1号四个马铃薯品种的茎段、叶片为外植体，以MS+蔗糖3％+琼脂0.8％为基本培养基，进行了愈伤组织培养再生与耐盐突变体筛选的研究。建立了马铃薯叶片、茎段的高效再生体系，研究了高盐直接胁迫与系列盐胁迫两种筛选方法、外植体类型、继代次数、盐的胁迫浓度等因素与耐盐突变体诱导关系的规律，获得了部分耐盐植株；并对耐盐植株进行了耐盐性鉴定。试验结果表明： 马铃薯茎段的愈伤组织发生频率高于叶片的愈伤组织发生频率。从诱导效果和生长状态来看，由叶片诱导愈伤组织的最佳培养基：东农303、鄂1号两品种为MS+6-BA 2.5mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)；费乌瑞它为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)；夏波帝为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)。由茎段诱导愈伤组织的最佳培养基：东农303、夏波帝、鄂1号为MS+6-BA 3.0mg·L~(-1)+NAA 0.01mg·L~(-1)；费乌瑞它为MS+6-BA 3.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)。 马铃薯不定芽分化对培养基的要求较为严格，不同品种的不同外植体对分化培养基要求不同。从叶片愈伤诱导的出芽天数、诱导率和生长状态来看：费乌瑞它的最佳分化培养基为MS+6-BA 2.5mg·L~(-1)+GA_3 5.0mg·L~(-1)；东农303为MS+6-BA 1.0mg·L~(-1)+IAA 0.1mg·L~(-1)+GA_3 2.5mg·L~(-1)；夏波帝为MS+6-BA 2.5mg·L~(-1)+IAA 0.5mg·L~(-1)+GA_3 2.5mg·L~(-1)；鄂1号为MS+6-BA 2.5mg·L~(-1)+IAA 0.1mg·L~(-1)+GA_3 1.0mg·L~(-1)。由茎段愈伤组织诱导不定芽的最佳分化培养基：费乌瑞它、鄂1号为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)；东农303为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)；夏波帝为MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.3mg·L~(-1)。 分别以叶片和茎段为外植体，以叶片和茎段诱导的愈伤组织为原始材料，进行耐盐突变体筛选，实验结果表明：不同品种的愈伤组织的耐盐性是有差异的：东农303、鄂1号两品种在细胞水平对NaCl的最大耐受浓度为2.0％；费乌瑞它为1.5％；夏波帝为1.0％。通过系列盐胁迫诱导产生的耐盐愈伤组织，易产生生理适应性，获得的耐盐愈伤组织在无盐的培养基上培养过程中，其耐盐性会减弱或消失。而通过高浓度盐胁迫下产生的耐盐愈伤组织没有此现象，其耐盐性一般不会减弱或消失。 叶片的耐盐愈伤组织，只有继代次数低于10次的在无盐胁迫诱导分化培养基 上有进一步诱导再生植株发生的能力，而在盐胁迫诱导分化培养基中，愈伤组织则 继代次数超过8次即很难继续分化再生;茎段的耐盐愈伤组织，在有盐胁迫与无盐 胁迫的诱导分化培养基上能继续分化的愈伤组织，最高继代次数分别是8代与12 代。因此，减少继代次数，而采用高盐直接胁迫筛选的方法，较为恰当。 经盐水灌溉试验鉴定，再生植株的耐盐性与愈伤组织的耐盐性有一定的差异， 东农303、鄂1号两品种的再生植株的耐盐性与愈伤组织的耐盐性水平相当，而费 乌瑞它和夏波帝两品种的再生植株没有达到愈伤组织的耐盐水平。