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猪卵母细胞的体外成熟与孤雌激活

陈晓宇  
【摘要】: 猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活的研究,有助于完善猪卵母细胞体外成熟体系、提高成熟率和探索出适宜的孤雌激活方法。但是现有猪卵母细胞体外成熟体系成熟率较低,孤雌激活率和激活质量也较差,制约猪胚胎工程进一步研究。本试验主要对猪卵母细胞不同收集方法、不同添加物在体外成熟体系中的作用以及温度和乙醇在孤雌激活中的激活效率进行了研究,获得了如下结果。 ①切剖法所获A级卵母细胞比例显著高于抽吸法和机械破碎法(41.7%、27.5%、20.3%,P0.05);切剖法所获卵母细胞的Pb Ⅰ排出率显著高于机械破碎法(41.6%、16.3%,P0.05),而且其卵丘扩散率显著高于抽吸法(88.9%、75.8%,P0.05)。 ②小、大、中(2-3mm、5-8mm、3-5mm)三组卵泡卵母细胞的体外成熟率依次为12.7%、31.3%、46.0%(P0.05)。大组卵泡内A级卵母细胞比例显著高中组(37.7%、28.4%,P0.01),但大组内的B级卵母细胞比例是显著低于中、小两组(45.9%、62.1%、59.2%,P0.05)。成熟中添加中组卵泡内的pFF成熟率显著高于添加大、小两组卵泡内pFF的效果(42.0%、11.0%、12.7%,P0.05)。 ③hCG(10IU/L)和PMSG(10IU/L)联合使用后成熟率显著高于单独使用PMSG(31.9%、17.5%,P0.05);E_2与激素联合使用相比促成熟作用不明显(35.0%、31.9%,P0.05);添加0.6mmol/L L-cysteine(半胱氨酸)和10μg/L rpGH(猪重组生长激素)后卵母细胞成熟率分别是30.4%和61.7%,均显著高于其它浓度(P0.05)。 ④体外成熟中添加10%FCS或10%NSC后均有较高的Pb Ⅰ排出率(30.0%、38.4%),且两者之间无显著性差异(P0.05);血清在添加时灭活处理与否,差异并不显著(32.2%、29.4%,P0.05)。 ⑤100μl微滴法培养卵母细胞的体外成熟率优于400μl四孔板(33.7%、26.5%)(P0.05);NCSU-23作为基础培养基的成熟效果优于TCM-199(63.4%、58.3%)(P0.05);卵母细胞在体外培养44h,48h的成熟率间无差异(P0.05);在培养24h后去掉培养液中的激素可显著提高卵丘扩散率(100%、77.5%,P0.05),但更换激素对Pb Ⅰ排出率无明显促进作用(P0.05)。 ⑥猪卵母细胞在7%乙醇处理10min后再经过25℃下40min的孤雌激活,2-cell孤雌卵裂率为33.9%,显著高于乙醇单独激活时的3.7%(P0.05);4-cell孤雌卵裂率是11.9%,显著高于温度单独激活时的1.6%(P0.05)。


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