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荣昌猪毛色分子遗传标记的研究

白小青  
【摘要】:本研究以编码肥大细胞生长因子受体(mast cell growth factor receptor)的KIT基因和酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因为候选基因,以几种典型毛色猪:大白、长白(全白色)、杜洛克(棕红色)和内江猪(全黑色)做为对照,通过聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(single strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products, PCR-SSCP),研究肥大细胞生长因子受体基因和酪氨酸酶基因的多态性与荣昌猪毛色变异间的关系,为探讨荣昌猪全白毛色产生的遗传机理奠定基础。 1 KIT基因的多态性检测 以荣昌猪(包括全白色和其他各种类型毛色)、杜洛克、长白和大白猪为实验动物,通过PCR-SSCP方法,检测了KIT基因的多态性,并对全白色荣昌猪的KIT基因进行了PCR产物测序。多态性检测结果表明:KIT基因的基因型具有品种特异性。在同一品种内,每个个体KIT基因的基因型完全一致;在品种间,荣昌猪和杜洛克的基因型一致,长白和大白猪的基因型一致。全白色荣昌猪KIT基因的测序结果表明:全白色荣昌猪的KIT基因没有发生类似于全白色长白、大白猪的G→A突变和AGTT缺失。这与传统的显性白等位基因控制显性白的理论相背。由此得出结论:荣昌猪的全白色并非受传统的显性白等位基因控制。另外,其他各种毛色类型荣昌猪在表型上与白底黑斑表型相似,KIT基因的基因型却与棕红色杜洛克猪完全一致,为ii型。这一发现推翻了白底黑斑表型产生于KIT基因Ip等位基因的解释,支持了白底黑斑表型可能产生于E位点作用的推测。 2 荣昌猪的TYR基因的克隆测序及其序列分析 在国内外首次克隆测序得到全白色荣昌猪的TYR基因外显子2,3,4部分序列。以所测序列为基准,与人、牛、鼠相应序列进行相似性比较,发现:TYR基因该区段在4个物种间核酸序列相似性至少达到83%,氨基酸序列相似性至少达到88%。此结果表明:TYR基因该区段在人、牛、鼠、猪上极其保守。 以2头全白色荣昌猪,1头大黑头荣昌猪,1头全黑色内江猪为实验动物,对TYR基因外显子1进行了克隆测序及其序列分析。结果表明:2头全白色荣昌猪所测序列100%相同,全黑色内江猪序列与全白色荣昌猪序列100%相同,大黑头荣昌猪的序列相对于全白色荣昌猪序列在第319和551碱基处分别发生C→T、A→G突变。此两种突变均未造成氨基酸的改变,属于同义突变。将所测4头猪的DNA序列与GenBank序列(AF181962、AF181963 )比对,发现所得到的4个序列与GenBank序列,在第537碱基处(GenBank序列:第539-540)均有C碱基的插入。 3 TYR基因的多态性检测及多态测序 以24头荣昌猪(包括全白色和其他各种类型毛色)为实验动物,进行TYR基因的多态性检测。结果显示:TYR基因外显子2,3,4呈单态,外显子1呈多态。外显子1 WP=8 多态是由于起始密码子上游第46位的G突变成A造成的。


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