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杜仲内生真菌活性物质的研究

朱红薇  
【摘要】:杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)单科、单属、单种,是我国特有的经济树种。杜仲作为国家二类保护植物,在现有资源被充分利用的基础上,也需要得到应有的保护。本研究小组成员从内生真菌的角度出发,希望在既不破坏现有的杜仲资源的基础上,还能开发出有益于医药事业的天然活性物质,对杜仲进行内生真菌的分离、鉴定,活性筛选,活性成分提取分离,活性化合物抑菌活性测定。结果如下:  1、首次采用组织分离法从杜仲的根、茎、叶中分离到80 株内生真菌。根据菌株形态及显微结构特征鉴定其中72 株,分属13 个属。其中链格孢属(Alternaria sp.)、镰孢霉属(Fusarium sp.)、茎点菌属(Phoma sp.)共38 株,为杜仲内生真菌的优势种群,共占已鉴定总株数的52.78%。根部分离得到菌株33 株最多,占已鉴定总株数的45.83%。分属9 个属。  2、以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)为测试菌种,对初选的20 株杜仲内生真菌进行活菌及代谢产物活性筛选。确定DL04(链格孢属)、DR0(1茎点霉属)和DR0(2拟青霉属(Paecilomyces sp.))为活性筛选实验的目的菌种。 3、对具活性的菌株DL04 进行液体发酵。提取其代谢产物粗品(25.0g)。运用硅胶柱层析、C18 柱层析、sephdexLH-20 柱层析、薄层制备层析及重结晶等各种分离纯化手段,得到四个化合物,通过波谱分析、化学分析手段鉴定为3β-羟基-5α,8α-表二氧-6,22-二烯麦角甾烷(Ⅰ)、一个甾体类化合物(Ⅱ)、一个脂肪族化合物(Ⅲ)和糖苷(Ⅳ)类化合物。其中化合物Ⅰ为首次在杜仲内生菌DL04 中分离得到。 4、定性、定量测出化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、绿脓杆菌的最小抑菌浓度,以及抑菌率。证明三种化合物对测试菌均有不同程度的抑制作用,具有进一步研究的价值。


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