山羊卵母细胞体外成熟及核移植研究

【摘要】：研究了在培养液中添加不同浓度的EGF﹑IGF-1 以及EGF 联合IGF-1 对山羊有腔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:1)10μg/L﹑20μg/L﹑30μg/LEGF 对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P0.05) 。(2) 10μg/L的IGF-1 对山羊卵母细胞体外成熟无显著影响(P0.05);0μg/L﹑30μg/L的IGF-1 能显著提高山羊卵母细胞体外成熟率(P0.05) 。(3) 添加10μg/LEGF+20μg/LIGF-1 组卵母细胞体外成熟率显著高于添加20μg/L 的IGF-1 组(P0.05),极显著高于添加10μg/LEGF 组和对照组(P0.01) 。结论:EGF 和IGF-1 对有山羊卵母细胞体外成熟有协同作用。 体外成熟的卵母细胞用CB 处理30min 或不用CB 处理,经孤雌激活后,在CR1aa(实验Ⅰ)和SOFaa(实验Ⅱ)中培养,在培养第3 d 添加10%FBS 或10%EGS 观察发育情况。结果:在实验Ⅰ中,CB 处理组和无CB 处理组间孤雌激活卵卵裂率和囊胚率无显著差异,CB 处理组囊胚率稍高于不用CB 处理组;在CR1aa 中添加10%EGS 的孤雌胚囊胚率显著高于添加10%FBS(p0.05)。在实验Ⅱ中,CB 处理组和无CB 处理组间孤雌激活卵卵裂率和囊胚率无差异;在SOFaa 中添加10%EGS 的孤雌胚囊胚率显著高于添加10%FBS(p0.05)。结果表明:CB 对山羊孤雌激活胚胎体外培养无显著影响。在培养液中添加EGS的效果显著高于添加FBS。SOFaa 对山羊孤雌激活胚的培养效果优于CR1aa。 以山羊胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和人胎儿成纤维细胞为供体进行核移植研究。对比了胞质内注射和电融合对重组胚早期发育的影响。结果:应用胞质内注射法时,颗粒细胞和山羊胎儿成纤维细胞支持重组胚的发育能力极显著高于人胎儿成纤维细胞;颗粒细胞显著高于山羊成纤维细胞。山羊成纤维细胞电融合成功率显著高于人胎儿成纤维细胞。结论:人胎儿成纤维细胞能在山羊去核卵母细胞内重组发育,但发育能力极显著低于山羊胎儿成纤维细胞和颗粒细胞。