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郏县红牛卵泡卵母细胞体外受精的研究

田万强  
【摘要】:本实验以屠宰场采集的郏县红牛卵巢为研究材料,抽取卵巢表面2~6mm 卵泡中的卵母细胞,通过体外成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)和受精卵体外培养(IVC)研究,探讨郏县红牛体外受精的影响因素,建立郏县红牛体外胚胎生产可行性程序,结果如下: 1.质量不同的A、B 两类卵巢上所获可用卵母细胞数(2.0 枚Vs5.5 枚)、两类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(55.00%Vs80.00%)均有显著差异(P0.05),卵裂率(37.50%Vs60.17%)有极显著差异(P0.01)。说明卵巢质量是影响郏县红牛卵母细胞体外成熟和受精的重要因素。 2.比较了四种成熟培养时间(20h、20h、24h、28h)对郏县红牛卵母细胞成熟率和卵裂率的影响,结果显示郏县红牛卵母细胞培养20h、20h、24h、28h成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,20h、24h、28h组的成熟率与20h组相比,差异显著(P0.05)。卵裂率20h、24h组(51.79%、58.16%)明显高于20h组(38.24%)、28h 组(36.98%)(P0.05),但20h、24h 组卵裂率差异不显著(P0.05)。说明郏县红牛卵母细胞成熟培养的最佳时间范围为20~24h,20h,卵母细胞成熟不够充分;超过28h,卵母细胞会出现退化、衰老,卵裂率显著下降。 3.以TCM-199 为基础培养液,当添加10%FCS 在外源激素FSH、LH、E_2 共同参与下与单独添加10%ECS效果相当,两种血清添加组卵母细胞成熟率(73.33%Vs75.00%)、卵裂率(52.21%Vs54.35%)均无显著差异(P0.05),说明在卵母细胞成熟培养液中单独添加ECS 完全可以替代FCS 与外源激素的联合使用,这样可使培养液配制简化。 4.激素对郏县红牛卵母细胞的成熟和受精能力有一定的影响。在成熟培养液中添加10μg/mlFSH、1μg/mlE2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10μg/mlFSH、10μg/mlLH、1μg/mlE2 的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P0.01),说明在成熟培养基础液中添加一定量的FSH、E2 对卵母细胞成熟和以后的卵裂有促进作用。Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%,说明Ⅱ组添加LH 激素后,与FSH 和E2 两种激素有很好的协同作用,更有利于卵母细胞的成熟。 5.获能前三种冻精处理方法(直接离心洗涤法、上游法、Percoll法)对精子处理获能,IVF 后受精卵的卵裂率(依次为51.58%、52.83%、53.20%)均无显著差异(P0.05);桑椹胚、囊胚发育率Percoll法处理组(16.66%、10.18%)与上游法处理组(17.85


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