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胚胎工程技术在奶牛繁育中应用的研究

刘俊平  
【摘要】:本试验对应用胚胎工程技术提高奶牛繁育效率进行了系统的研究,包括MOET 技术、IVP 技术、性别控制技术以及引起奶牛繁殖障碍疾病的防治等几方面,得到如下结果与结论: 1 共超排供体奶牛1127 头次,回收胚胎共10900 枚,可用胚胎数量为6942 枚,平均每头次获得胚胎数量为6.73 枚。应用3 种超排处理方案,即PSO1、PSO2 和PSO3,超排成功率分别为89.50%、90.02%和98.54%,平均回收可用胚胎数分别为6.12 、5.98 和7.56 枚,利用发情周期9~11 d 的自然发情奶牛直接超排,效果最好。 2 对青年奶牛进行超排处理,应限制超排起始时间,15 月龄以上的青年奶牛超排效果较好;供体牛连续重复超排控制在3 次以内,连续4 次超排处理后极大降低胚胎可利用率;另外超排处理的间隔最短时间应该选择46~60 d;经产牛1~3 胎次超排效果较好,7 胎次以上差;产后间隔时间选取80~90 d 为宜。 3 供体奶牛采用性控精液进行超排处理,平均回收胚胎数为9.02 枚,平均可用胚胎为4.70 枚,受胎率与正常体内胚胎移植后的受胎率接近,说明采用性控精液生产性控胚胎可行。 4 研究中共处理受体牛5083 头,二次PG 法、CIDR 法和一次PG 法处理受体牛同期发情率分别为75%、78.33%和72%,受体移植后的妊娠率鲜胚达到55%以上,冻胚受胎率也在46%~47%,3 种处理方法结果相近。同期发情处理后青年受体牛比经产牛的利用率高,同时受体的营养水平严重影响受胎率。认为受体牛的同期发情以较为简便的二次PG 法处理为宜。自然发情受体的利用率达到85%,显著高于二次PG 法注射同期处理组,选取自然发情牛作为受体显著提高胚胎移植成功率。 5 采用直接解冻和分步解冻2 种方法解冻胚胎,移植后受体受胎率分别为45.22%和47.64%,表明以EG 作为冷冻介质冷冻保存胚胎并于35℃解冻后可以直接移植。 6 未孕受体牛以中医中药调理后进行同期发情处理,受体利用率显著提高,受胎率也有所增加;经产牛在产后20~25 d 应用GnRH 联合PG 调节激素水平,受体利用率和自然恢复组相近,而分娩到同期发情处理间隔缩短。 7 直径为3~6 mm的卵泡所获得卵母细胞体外成熟,受精率和囊胚形成率较高;在成熟液中添加10 ng/mL的EGF,利于核质成熟;卵母细胞成熟过程中,颗粒细胞保持至少3层以上,可以为其成熟提供必要条件,并能促进精子获能和正常受精。 8 Percoll法速度快,活精子数量多,但是多精子受精多,而上浮法回收精子数量少,可是精子的总体活力要高于Percoll法;在获能液中添加咖啡因对精子的活力和受精能力无显著的影响,甚至降低了精子的存活时间。


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