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中国野葡萄资源的RAPD标记及其应用的研究

罗素兰  
【摘要】:本研究以起源于中国的18 个野生种,1 个欧美杂交种,7 个欧洲葡萄品种和1 个砧木品种,共83 份葡萄材料,用RAPD 分析建立了供试材料的RAPD 指纹图谱,从280 个随机引物中筛选出20 个Operon 引物扩增供试材料,产生了191 条多态性带用于聚类分析,获得了83 份材料的遗传距离矩阵及聚类分析树系图,并对其亲缘关系进行了研究。以83-4-96(毛葡萄)×粉红玫瑰(欧洲葡萄)(88-110 组合)种间杂交一代(F1)为作图群体,进行了RAPD 分子连锁图的构建。以上述群体及其F2代和另一个种间杂交组合旬-3(毛葡萄)×白玉霓(欧洲葡萄)(88-84 组合)为材料,获得了抗霜霉病和感霜霉病基因的RAPD 标记,并对其定位。将这两个标记克隆测序后在分析序列的基础上,合成了两对寡聚核苷酸作引物进行PCR 扩增,将RAPD 标记转化为SCAR 标记。 本研究的主要内容和结果如下: 1 葡萄基因组DNA 的提取和RAPD 体系优化 对适合葡萄基因组提取的CTAB 法进行了改良,取用处于旺盛生长的梢尖为提取材料,采用优化的RAPD 反应体系(10ng 模板DNA,150μM dNTPs,1.5mM Mg~(2+)浓度,1U Taq DNA 聚合酶,0.5μl Operon 引物(4pM),25μl 反应体积),不但节约试材,试剂,且加样方便。为以后大量样品的RAPD 分析奠定了基础。 2 中国野葡萄资源的RAPD 指纹及其分类研究 从280 个Operon 随机引物中筛选出20 个多态性好的引物对供试83 份材料进行RAPD 分析,获得了各份种质的RAPD 指纹图谱。平均每个引物每个模板可扩增3~7 条带,最少的为1 条带,最多的为11 条,多态性百分率为16.7~90.9%,扩增带大小为100~3000 bp。可记录的带共有278 条,多态性带为191条。OPQ04,OPJ01 二者之一与OPH19,OPP02,OPA15,OPJ07,OPU16 中任何一个引物联合能将所有种,品种和株系区分开。 根据多态性DNA 带,分别计算了相似系数(S)和遗传距离(D)。应用UPGMA


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