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生产转基因鸡基础理论和方法的研究

李碧春  
【摘要】:生产转基因鸡,需要先对鸡卵子、胚胎操作等必需的基础理论和方法进行了解。但目前关于这方面的系统研究国内外报道较少且零散,特别是对鸡卵体外受精、早期胚胎在体内发育的研究国内尚未见有报道。基于当前的迫切需要,本研究对鸡卵母细胞体外受精、早期胚胎发育、鸡胚代用蛋壳培养及异体胚盘移植;鸡原始生殖细胞(PGCs)起源、迁移、聚集和定居及其分离和体外原代培养等进行了系列研究,试验的主要结果如下: 1 在80只母鸡产蛋后的30~60min内手术法收集卵子,新鲜的Ringer's液中洗涤三遍,与精子共孵育,体外受精后移入受体母鸡输卵管中。在44只体外受精的受体母鸡中,有28只产蛋,产蛋率为63.63%(软壳蛋7枚)。其中产出受精蛋为8枚,受精率为18.18%(28.57%)。孵化后有6枚发育,孵化率为13.64%(75%),在28只蛋中有3枚出雏,出雏率为10.71%。尽管孵化率和出雏率低,但是在8枚受精卵中有3枚孵出小鸡(37.50%),表明鸡体外受精技术路线是可行的。 2 比较供体母鸡在产蛋后不同时间手术法取卵,结果显示,30~40min内是获取卵子的最佳时期。 3 受体母鸡产蛋后在不同时间内移植受精卵,观察产蛋情况,结果显示,30±10min内移植胚胎较为适宜。 4 产蛋高峰期和产蛋下降期母鸡作为受体,比较其对胚胎移植的影响,10只产蛋下降期的母鸡移植胚胎后,无一产蛋,证明该期母鸡不适合作胚胎移植受体鸡。 5 鸡卵体外受精体外发育,可发育到明区形成期,发育率为10%。 6 54只乌骨鸡,在产蛋后,不同时间获取受精卵,观察早期胚胎发育变化规律。依据胚盘形态的变化,可将鸡胚在体内发育过程分为两个时期:①距前一个蛋产出后5.5h到15.5h为鸡胚的卵裂期,卵裂的结果形成厚约6~7层细胞的胚盘。②距前一个蛋产出后17.5h至明区形成期,为囊胚期晚期,在胚盘中央形成透明的明区和周围不透明的暗区。在制作转基因鸡时,若欲获得较大卵裂球,则取产蛋后10.5~15.5h的胚胎较为适宜;若取较小卵裂球制作嵌合体时,则取囊胚晚期细胞为宜。 7 乌骨鸡受精卵第一次分裂发生在产蛋后5h,桑椹期在产蛋后11.5h,囊胚期在产蛋后15.5h。 8 产蛋后5h,乌骨鸡胚胎已发生第一次卵裂,说明第一次卵裂是发生在5h,早于前人报道的结果。最初7.5h,鸡受精卵的分裂速率较为一致,约每半小时分裂一次,以后


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